Условия и методы культивирования тканей in vitro. Современные проблемы науки и образования Материалы и методика

Разное 14.03.2024

Специальность ВАК РФ06.01.08
Количество страниц 408

Совершенствование технологии ускоренного размножения винограда методом in vitro

Введение.

Глава 1. Культура изолированных тканей и органов растений in vitro (обзор литературы).

1.1. История развития метода in vitro и области его применения.

1.2. Основные методы клонального микроразмножения растений (in vitro).

1.2.1. Индукция пролиферации пазушных меристем

1.2.2. Развитие адвентивных побегов из ткани экспланта.

1.2.3. Регенерация растений из каллуса.

1.3. Основные этапы клонального микроразмножения растений in vitro.

1.3.1. Регенерация растений из апикальной меристемы.

1.3.2. Укоренение микропобегов.

1.4. Освобождение растений от вирусных заболеваний.

1.5. Факторы, влияющие на процесс регенерации и клональное микроразмножение in vitro.

1.6. Адаптация растений при пересадке в нестерильные условия

1.7. Хранение пробирочных растений.

Глава 2. Цель, задачи, объект, методика и условия проведения исследований.

2.1. Цель и задачи исследований.

2. 2. Объект исследований.

2. 3. Организация и методика проведения работы.:.

2.3.1. Подготовка и стерилизация исходного материала.

2.3.2. Приготовление питательных сред.

2.3.3. Работа в стерильном боксе.

2.3.4. Условия культивирования.

2.4. Элементы учетов и методы обработки полученных данных.

Глава 3. Введение эксплантов винограда в культуру in vitro и их развитие на этапе микроразмножения.

3.1. Введение в культуру in vitro.

3.2. Регенерация растений из апикальной меристемы.

3.3. Влияние минерального состава питательной среды на развитие эксплантов винограда.

3.4. Влияние регуляторов роста на развитие эксплантов винограда в условиях in vitro.

3.4.1. Фаза удлинения побегов.

3.4.2. Этапы укоренения побегов винограда in vitro

Глава 4. Адаптация растений винограда in vitro при пересадке в нестерильные условия in vivo.

4.1. Адаптация растений винограда в условиях in vitro.

4.2. Адаптация растений винограда в условиях in vivo.

4.2.1. Перевод пробирочных растений в нестерильные условия

4.2.2. Влияние температуры, света и влажности воздуха при адаптации растений полученных in vitro.

4.2.3. Изучение возможности значительного повышения коэффициента размножение винограда.

4.2.4. Применение регуляторов роста в период адаптации растений винограда в условиях in vitro (сосуд-пакетах).

4.3. Доведение растений винограда, размноженных методом in vitro, до стандартных саженцев в условиях теплицы.ИЗ

Глава 5. Иммуноферментный анализ на содержание вирусов в растениях винограда, размноженных методом in vitro, и определение вирусоносителей на участках, планируемых под микроматочники новых сортов винограда.

5.1. Тестирование посадочного материала винограда полученного методом in vitro на наличие вирусных заболеваний.

5.2. Определение вирусоносителей на участках, планируемых под микроматочники новых сортов винограда.

5.2.1. Методика отбора средней пробы почвы для выявления почвенных нематод.

5.2.2. Методика приготовления препаратов.

Глава 6. Воздействие цеолитовых субстратов на укоренение, рост и развитие растений винограда при микроклональном размножении

6.1. Применение природных цеолитов в сельском хозяйстве

6.2. Цель и задачи, материал и методика проведения исследований.

6.3. Определение оптимального гранулометрического состава фракций цеолитового субстрата.

6.4. Влияние цеолита на укоренение, рост и развитие растений в условиях in vitro.

6.5. Влияние цеолита на укоренение, рост и развитие растений винограда в условиях выращивания сосуд-пакетах

6.6. Применение цеолита при доращивании растений in vitro в условиях защищенного грунта

6.7. Изучение водного режима, физических свойств субстратов и водообеспечение растений винограда.

Глава 7. Переход на промышленную основу производства посадочного материала винограда методом in vitro.

7.1. Производство посадочного материала винограда в лаборатории in vitro.

7.2. Адаптация посадочного материала винограда в условиях in vivo.

7.3. Закладка микроматочников новыми перспективными, оздоровленными сортами винограда.

Глава 8. Обсуждение результатов исследований.

ЧАСТЬ ВТОРАЯ Реакция семенных сортов винограда различных эколого-географических групп на применение гиббереллина

Введение.

Глава 1. Роль гиббереллинов в регуляции роста и плодоношения виноградного растения и перспективы его использования в производстве (обзор литературы).

1.1. Гиббереллины, их роль и место в гормональном комплексе виноградного растени.

1.2. Отзывчивость различных сортов винограда на обработку гиббереллином.

1.3. Практическое использование гиббереллина в технологическом комплексе возделывания виноград

Глава 2. Цель, задачи и методика проведения исследований.

2.1. Место проведения опытов, цель и задачи.

2.2. Объект исследований и схема опытов.

2.3. Элементы учета и наблюдений.

Глава 3. Влияние гиббереллина на продуктивность, качество и вегетативные органы семенных сортов винограда.

3.1. Структура урожая винограда.

3.2. Влияние гиббереллина на рост и развитие ягод и семян винограда

3.3. Физиологические и биохимические показатели.

3.4. Динамика роста побегов различных сортов винограда при обработке их гиббереллином и его влияние на конечный прирост и вызревание лозы.

3.5. Влияние гиббереллина на динамику роста листьев.

3.6. Особенности анатомического строения семенных сортов винограда, обработанных гиббереллином.

3.7. Показатели характера перезимовки и плодоносности кустов винограда семенных сортов при применении гиббереллина.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Совершенствование технологии ускоренного размножения винограда методом in vitro и применение регуляторов роста в условиях in vitro и in vivo»

Виноград - одна из самых распространенных сельскохозяйственных культур, играющая существенную роль в мировой экономике.

Как свидетельствует мировой опыт, основной тезис научно-технического прогресса заключается в том, что только решение вопросов, имеющих большое научное значение, приводит в конечном итоге и к большому экономическому эффекту. В этом аспекте наиболее перспективными являются пути и методы БИОТЕХНОЛОГИИ - науки, возникающей на стыке нескольких биологических дисциплин: генетики, вирусологии, микробиологии и растениеводства.

Увеличение производства винограда требует не только расширения площадей, но и разработка и совершенствование технологий, обеспечивающих ускоренное размножение перспективных сортов, повышение урожайности виноградных насаждений.

Во многих странах мира большое значение в настоящее время придается внедрению в производство интенсивных методов производства высококачественного посадочного материала винограда и разработке новых высокоэффективных способов закладки виноградников.

Рост и урожайность винограда, срок вступления в плодоношение во многом зависят от качества посадочного материала.

В настоящее время биотехнология стремительно выдвигается на передний край научно-технического прогресса. Этому способствуют два обстоятельства. С одной стороны, бурное развитие современной молекулярной биологии и генетики, опирающихся на достижения химии, физики, что позволило использовать потенциал живых организмов в интересах хозяйственной деятельности человека. С другой стороны, острая практическая потребность в новых технологиях, призванных ликвидировать нехватку продовольствия, энергии, минеральных ресурсов.

Как наука биотехнология молода, развитие ее стремительно. Поток информации иногда противоречив или доступен лишь узким специалистам.

За последние двадцать лет значительно расширились и углубились исследования по проблеме культуре тканей многих сельскохозяйственных растений, в том числе и винограда. Их направленность преследует разные цели: вскрытие потенциальных особенностей тех или иных тканей к регенерации; поиск путей индуцирования морфо- и органогенеза в каллусе; попытка получения гаплоидных растений из меристемного апекса или верхушек побегов после фитосанитарной термотерапии; микроклонирование (микроразмножение) как способ исключительно быстрого и весьма эффективного вегетативного размножения в асептических условиях. В последнем случае микроразмножение служит сокращению длительности селекционного процесса и ускорению внедрения новых сортов в производство.

Из-за недостаточной производительности существующих методов размножения посадочного материала продвижение в производство новых сортов затягивается на десятилетия. С учетом этого назрела необходимость разработки и внедрения новых методов размножения сортов винограда. Одним из эффективных способов решения проблемы является технология клонального микроразмножения винограда.

Актуальной проблемой настоящего времени является сокращение или прекращение использования химических веществ в борьбе с болезнями, вредителями и сорной растительностью с целью охраны окружающей среды от загрязнения за счет использования биологических и агротехнических методов борьбы, внедрения сортов, устойчивых к болезням и вредителям, не требующих химических средств борьбы. Поэтому особый интерес представляют сорта технического и столового направления, отличающиеся повышенной устойчивостью к болезням (мильдью, оидиум, серая гниль, антрокноз и др.) и морозам. И это понятно. Ведь возделывание винограда комплексно-устойчивых сортов выгодно как экономически (меньше затрат труда и средств), так и экологически (продукция без ядохимикатов).

Однако отсутствие посадочного материала накладывает свой отпечаток на глобальное решение вышеуказанных проблемных вопросов, то есть обычная технология размножения винограда не отвечает требованиям времени, не может в короткие сроки обеспечить виноградарские хозяйства комплексно-устойчивыми и хозяйственно ценными сортами винограда.

Одно из существующих препятствий на пути внедрения нового сорта в практику - невозможность получения в течение одного сезона большого количества посадочного материала для вегетативного размножения. Это препятствие может быть устранено за счет использования достижений биотехнологии, которая предлагает селекционерам эффективный и быстрый метод микроразмножения растений. Очень важно и то, что псадочный материал, получаемый этим путем, генетически идентичен давшему ему начало материнскому растению.

В виноградарстве клональное размножение - получение ряда следующих друг за другом поколений генетически однородных организмов в результате вегетативного размножения от одного общего материнского организма - является традиционным. При клональном микроразмножении указанная традиция сохраняется, но значительно повышается коэффициент вегетативного размножения за единицу времени, при одновременном сокращении занимаемой площади питомников.

Клональное микроразмножение имеет ряд и других преимуществ и особенностей, а именно: проводится в лабораторных условиях, что исключает влияние различных факторов окружающей среды; имеет высокий коэффициент размножения; позволяет производить оздоровленный от вирусов и бактериального рака посадочный материал; позволяет производить размножение растений круглогодично и на потоке; появляется возможность размножать сорта, которые плохо укореняются обычным способом; получать с единицы площади максимальное количество растений; при размножении исключается возможность перезаражения растений; при интродукции растений устраняется вероятность завоза и распространения карантинных объектов; позволяет длительно хранить растения, находящиеся в пробирках, при соответствующих условиях; дает возможность селекционерам сохранить требуемый генофонд; ускоренно размножать новые сорта и клоны для передачи их в ГСУ и создавать в хозяйствах микроматочники интенсивного типа; имеет большое природоохранное и ресурсосберегающее значение.

Наиболее существенные результаты диссертации, их новизна выражаются в следующем: установлены оптимальные концентрации растворов регуляторов роста (ИМК, 6-БАП, ПС, 2-iP, ДРОП), их влияние на развитие эксплантов в условиях in vitro, а также на укоренение, рост и развитие растении, в период их адаптации и выгонки в условиях in vivo; впервые для адаптации и выгонки пробирочных растений изучены и рекомендованы субстраты из цеолитов Тедзаминского месторождения; впервые изучен и рекомендован метод адаптации в широких пробирках, который позволяет в весенний период высаживать растения in vitro непосредственно в теплицу, минуя промежуточный этап адаптации в сосуд пакетах; на этапе дополнительного повышения коэффициента размножения в условиях in vivo (в сосуд-пакетах) изучено и рекомендовано использовать перлит двухразового обжига; впервые проведены широкомасштабные исследования на наличие вирусоносителей на участках планируемых под закладку маточников оздоровленным посадочным материалом винограда и установлено, что из трех выбранных для закладки в них маточников, в госхозе «Гребенской» имеются вирусоносители Xiphinema index и Longidorus elongatus; проведенный нами анализ на наличие вирусов в растения полученных методом in vitro по методу Elisa teste показал, что в растениях оздоровленных в условиях in vitro в них вирус отсутствует; впервые проведено агробиологическое, цитоэмбриологическое и хозяйственно-технологическое изучение влияния гиббереллина при сплошном опрыскивании основных столовых и столово-винных сортов винограда и установлена возможность и целесообразность применения приема механизированной обработки сортов винограда с функционально-женским типом цветка, обеспечивающих увеличение рентабельности на 27,4%; в результате испытания гиббереллина на семенных сортах винограда установлено, что характер действия препарата на виноградное растение зависит от принадлежности сортов к различным эколого-географическим группам, биологических их особенностей, концентрации раствора препарата и срока обработки.

После распада СССР роль виноградарства Северного Кавказа, как единственной зоны возделывания винограда в Российской Федерации, значительно возросла.

Для дальнейшего развития виноградарства жизненно важным является реконструкция насаждений. Обусловлено это несколькими причинами. Одна из них заключается в том, что возделываемые в настоящее время сорта малопригодны для индустриальной технологии (неустойчивы к морозам и болезням, малотранспортабельны и непригодны для длительного хранения). Около 75% насаждений в Чеченской Республике приходится на технический сорт Ркацители, поэтому работы, проводимые по ускоренному размножению винограда методом in vitro являются актуальными как для Чеченской республики, так и для всей зоны виноградарства юга Росии.

На основе совершенствованной нами технологии in vitro, полученный посадочный материал реализовывали хозяйствам Чеченской республики, Дагестанской республики и Ростовской области. Таким образом, созданы микроматочники новых перспективных сортов винограда, в госхозах Чеченской Республики: «Восточный», «Авангард», «Советская Россия», в ОПХ «Гикаловское», в Дагестанской Республике госхозе «Аксай», в Ростовской облаете госхозе «Краснодонский». А также переданы на госсортоиспытательный участок, расположенный в совхозе «Бурунный», для прохождения испытаний следующие сорта: Кодрянка, Агат донской, Виорика, Кишмиш лучистый, Подарок Магарача, Лакхеди мезеш, Юбилей Журавля, Мускат янтарный.

Учитывая длительность прохождения государственного испытания новых сортов винограда, лаборатория тканевой культуры отдела виноградарства позволит сократить срок передачи остродефицитных сортов и клонов винограда в хозяйства в 10 раз (с 20.25 лет до 2.3 лет), создать маточники высоких производственных категорий.

Проходя стажировку в ведущих странах мира по производству и переработке винограда, такие как Франция, Италия, Испания, США, Австралия и др. (всего 16 стран мира), автор знакомился с новейшими технологиями размножения и культивирования винограда, в том числе размножение винограда методом in vitro.

Во Франции основные исследования по in vitro винограда проводятся в лабораториях тканевой культуры Национального научно-исследовательского института в Монпелье под руководством профессора Boubals D. и на Национальной (Государственной) опытной станции по оздоровлению, которая расположена на юге Франции на прибрежных песках Средиземного моря, под руководством профессора Grenan S. Основные направления научных работ:

Оздоровление и размножение методом in vitro посадочный материал винограда,

Координация всех научно-исследовательских работ в стране по санитарной и клеточной селекции,

Прививка винограда в условиях in vitro и изучение совместимости различных привоев с подвоем,

Создание базовых маточников, размножение и распространение оздоровленного посадочного материала винограда по всей стране.

В Испании в Научно-исследовательском институте Агробиологии исследователями Martinez M.C.R. и Mantilla J.L.G. проводятся исследования по вопросам сохранения генотшшческой стабильности у растений, размноженных в культуре изолированной ткани и устранением характера ювенильности. В Португалии, Аргентине и Венгрии занимаются изучением общих вопросов оздоровления посадочного материала винограда и созданием базовых маточников. В Италии и США под руководством профессоров Woker

R. и Meridit К. в условиях in vitro исследуют проблемы, связанные с генетической инженерией и клеточной селекцией винограда.

Заключение диссертации по теме «Виноградарство», Батукаев, Абдулмалик Абдулхамидович

1. В результате испытания гиббереллина на семенных сортах винограда было установлено, что действие препарата на виноградное растение зависит от биологических особенностей сорта, концентрации раствора препарата и срока обработки.

2. Сорта винограда группы с. опе^аИв в целом более перспективны для практического использования гиббереллина, чем сорта групп с. осЫ<1еп1аН8 Ие^. и с. ропйка Ке§т. Так, у сортов с. осаёеп1аН8 Рислинга и Муската венгерского при обработке их насаждений гиббереллином в конце цветения произошло значительное увеличение горошения ягод и уменьшение числа нормально развитых ягод. У сортов же с. опеп1аН8 Ме|»г. Сурхак китабский, Халили черный, Тайфи розовый, а также сортов с функционально женским типом цветка Каттакурган и Нимранг, напротив, увеличилось количество ягод в грозди.

3. При обработке насаждений винограда гиббереллином у обоеполых сортов с. опег^аНБ Ые^. Юмалак, Сурхак китабский, Халили черный, Джанджал кара, Тайфи розовый через 10 дней после цветения увеличивается масса грозди. У сортов, имеющих функционально женский тип цветка, Каттакурган и Нимранг увеличение массы грозди отмечается как через 10 дней после цветения, так и в конце цветения.

4. Для повышения урожайности для всех представителей трех эколого-географических групп сортов является срок обработки через 10 дней после цветения. Для сортов с. осаёейаИз Рислинг, Мускат венгерский - обработка гиббереллином в концентрации 50 мг/л, а для сортов с. опе^аИв - в обеих концентрациях 25 мг/л и 50 мг/л. У сортов с функционально женским типом цветка наибольшая прибавка урожая получена в варианте при обработке в конце цветения в концентрации 50 мг/л.

5. Влияние гиббереллина на содержание сахара в ягодах винограда зависит от биологических особенностей сорта, развития семян в ягоде. У семенных сортов в том случае, когда гиббереллин вызывает увеличение в грозди числа бессемянных ягод, он способствует повышению сахаристости, ускорению сроков созревания, что является важным фактором особенно для сортов раннего периода созревания.

6. Обработка семенных обоеполых сортов с. осЫёе^аИз методом сплошного опрыскивания кустов раствором гиббереллина в концентрации выше 25 мг/л, а для обоеполых семенных сортов с. опеп1аИз выше 50 мг/л нежелательна, так как это может вызвать усиление роста побегов и снижение плодоносности кустов.

7. Среди семенных сортов винограда наиболее отзывчивы на обработку гиббереллином сорта с функционально женским типом цветка. Под действием препарата увеличиваются размеры ягод и повышается их завязываемость, что приводит к увеличению массы грозди и урожая. Эффективны концентрации от 25 до 50 мг/л. Обработку можно производить с конца цветения и в течение 10 дней после него. Лучшие результаты дает однократная обработка в конце цветения раствором в концентрации 50 мг/л. В связи с тем, что препарат у этих сортов не вызывает избыточного роста побегов и снижения плодоносности кустов, обработку можно проводить методом сплошного опрыскивания.

8. Наиболее перспективным на сортах винограда западно-европейской группы сортов является использование гиббереллина в смеси с препаратом дропп в срок через 5 дней после цветения. Обработка смесью препаратов способствует увеличению размеров ягод, повышению их завязываемости в грозди и существенному увеличению массы гроздей. Качество винограда при этом сохраняется на высоком уровне.

Обработку сортов винограда с функционально женским типом цветка гиббереллином можно проводить механизированным способом. Для этой цели используют опрыскиватель ОУМ-4. Однако, можно использовать серийный опрыскиватель ОН-400-5 со специально установленными вертикальными штангами. При опрыскивании, для получения хорошего качества обработки, необходимо применять совмещенный принцип: штанговое опрыскивание с вентилятором (с целью обнажения соцветий под действием воздушного потока).

Для получения высоких прибавок урожая от применения гиббереллина следует перед механизированной обработкой тщательно провести выломку и подвязку зеленых побегов с целью качественного покрытия соцветий раствором препарата.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В результате испытания гиббереллина на семенных сортах винограда было установлено, что действие препарата на виноградное растение зависит от биологических особенностей сорта, концентрации раствора препарата и срока обработки. Для повышения урожайности для всех представителей трех экологснгеографических групп (с. осЫёе^аШ, с. ропШса, с. опе^аИв) является срок обработки через 10 дней после цветения. Для сортов с. осс1ёеп1аНз Рислинг, Мускат венгерский обработка гиббереллином в концентрации 50 "/л, а для сортов обоих концентрациях 25 ш/л и 50 ж/л.

Среди семенных сортов винограда наиболее отзывчивы на обработку гиббереллином сорта с функционально-женским типом цветка. Под действием препарата увеличиваются размеры ягод и повышается их завязываемость, что приводит к увеличению массы грозди и урожая. Эффективны концентрации от 25 ш/л до 50 ш!л. Обработку можно проводить с конца цветения и в течение 10 дней после него. Лучшие результаты дает однократная обработка в конце цветения раствором с концентрацией 50 ш!л Г связи с тем, что препарат у этих сортов не вызывает избыточного роста побегов и снижения плодоносности кустов, обработку можно проводить методом сплошного опрыскивания кустов.

Гиббереллин оказывал определенное влияние на фотосинтетическую деятельность растений, степень и направленность у всех включенных в опыт сортов был различным. У сортов с функционально-женским типом цветка Каттакурган увеличивалась чистая продуктивность фотосинтеза по мере повышения концентрации препарата. У обоеполого сорта винограда Хусайне изменения практически отсутствовали, а у другого обоеполого сорта Баян ширей отмечено снижение чистой продуктивности фотосинтеза при обработке гиббереллином.

Существенно не изменилось содержание хлорофилла в листьях винограда, обработанных гиббереллином. Лишь у сорта Баян ширей в варианте с концентрацией 50 мг/л содержание хлорофилла снижалось, но только в зоне побега с интенсивно растущими листьями.

Почти у всех изучаемых в опыте сортов винограда гиббереллин способствовал повышению сахаристости сока ягод. В основном повышение сахаронакопления наблюдалось при обработке препаратом в конце цветения.

На основании имеющихся в настоящее время данных и проведенных исследований можно констатировать, что нормальное развитие ягод у винограда стоит в неразрывной связи с развитием в них семян.

Гиббереллин практически на всех сортах винограда вызывает угнетение развития семян. Это выражается в уменьшении числа семян и снижении средней массы одного семени. Под действием препарата образуются бессемянные ягоды, количество ягод с одним семенем и с двумя семенами увеличивается. Так, на сорте винограда Каттакурган при обработке гиббереллином было получено 83,3 % бессемянных ягод, остальные 16,7% приходились на ягоды с одним и двумя семенами. По отношению к другим сортам следует выделить два сорта винограда Баян ширей и Тайфи розовый, у которых бессемянность ягод в процентном отношении соответственно образовалось 75 % и 83 %.

Сорта, имеющие более высокий (выше 45) показатель семенного индекса (отношение массы мякоти к массе семян) существенно отзываются на применение гиббереллина, чем сорта с низким семенным индексом.

Гиббереллин усиливает рост побегов семенных сортов винограда. Исключением являются сорта винограда с функционально женским типом цветка Каттакурган и Нимранг, на которые препарат повлиял несущественно на ростовые процессы. Последнее связано с тем, что у них значительно увеличилась урожайность, на что затрачивается большое количество продуктов ассимиляции.

Препарат практически на всех сортах улучшил вызревание лозы, которое имеет большое значение для плодоношения и размножения винограда. Однако, наиболее высокий процент вызревания побега отмечается у сортов винограда Рислинг и Ркацители.

При изучении роли гиббереллина в генеративном развитии виноградного растения мы установили, что препарат в зависимости от применяемых концентраций и сроков обработки может изменять морфогенез виноградного растения, направляя его по вегетативному пути. Микроскопические анализы свидетельствуют, что препарат изменяет форму и размер глазков. Подушечка глазка разрастается, наступает ее одревеснение. При концентрации гиббереллина 100 мг/л у сортов винограда Катгакурган, Баян ширей, Рислинг происходит выпад центральной почки. На сорте винограда Баян ширей, концентрация гиббереллина 50 мг/л, образует в глазках недоразвитые соцветия.

Фенологические наблюдения показывают, что применение препарата в конце цветения приводит к задержке распускания почек на 4-5 дней, а также гиббереллин вызвал снижение коэффициента плодоношения куста у сортов винограда Рислинг и Баян ширей при обработке в концентрации 50 мг/л в конце цветения. У остальных исследуемых сортов агробиологические показатели были на уровне контроля.

Глава 4. Влияние регуляторов роста на семенные сорта и перспективные селекционные формы винограда в условиях Молдавии

4.1. Влияние совместного применения Гиббереллина с препаратом Дроп на величину грозди и ее структуру

Как свидетельствуют литературные данные и результаты наших исследований, в целом сорта винограда, относящиеся к западно-европейской группе (с. осшёе^аНБ), отличаются за редким исключением индифферентной или негативной реакцией на обработку гиббереллином. В большинстве случаев препарат вызывает у них сильное изреживание гроздей, усиление горошения и снижение массы ягод. Отрицательный эффект усиливается по мере повышения концентрации раствора препарата. В целях установления возможности устранения негативного влияния гиббереллина на сорта западно-европейской группы нами был испытан способ совместного применения гиббереллина с препаратом дропп, обладающим цитокининовым действием. В качестве объекта исследований были отобраны новые перспективные селекционные формы селекции НПО "Виерул" Молдавской Республики. Исследования проводились в основной зоне промышленного возделывания сортов этой группы - Молдавской Республики, на экспериментальной базе НПО "Виерул".

Каждый вариант опыта включал в себя 10 модельных плодоносных побегов. Обработка растворами препаратов осуществлялась методом сплошного опрыскивания побегов с помощью ручного опрыскивателя. Схема опыта представлена в таблицах. В опыте проведены учеты массы грозди, величины и количества ягод в грозди, сахаристости сока ягод, количества и массы семян в ягодах каждой из учетных гроздей варианта по общепринятым в виноградарстве методикам.

Список литературы диссертационного исследования доктор сельскохозяйственных наук Батукаев, Абдулмалик Абдулхамидович, 1999 год

1. Абраменко Н. М., Стаканова Р. В., Чернец А. М. Микроразмножение плодовых - В кн.: Культура клеток растений и биотехнология: Тез. докл. IV Всесоюзной конф. Кишинев, 1983, с. 112.

2. Я. Абраменко Н. М., Леманова Н. В., Цурхан И. Г. Вирусные болезни земляники и методы получения безвирусного посадочного материала. - "Садоводство, виноградарство и виноделие Молдавии", 1973, вып. 4, с. 39-40.

3. Абраменко Н. М. Изучение возможности ускоренного размножения растений в культуре in Vitro // Вирусные микроплазменные и бактериальные болезни плодовых культур и винограда в Молдавии - Кишинев - 1980. - с. 100-105.

4. Ц. Алехно Г. Д. Клональное микроразмножение роз как перспективный способ получения высококачественного посадочного материала // Тез. докл. Респ. конф./Молодежь Удмуртии - ускорению научно-технического прогресса. - Устинов, - 1985, - с. 209-210.

5. Алехно Г. Д., Высоцкий В. А. Клональное микроразмножение роз.// Цветоводство. - 1986. - № 1 - с. 16-17.

6. Артамонов В. И. Биотехнология - агропромышленному комплексу. - М.: "Наука". - 1989. - 160 с.

7. Байраков В. В. Квопросу использования клиноптолитовых пород в растениеводстве // Научно-практическая конф. «Добыча,переработка и применение цеолитов»; Сб. Тез. докл. Тбилиси.- 1986.-е.106-108.

8. Бартин И.В., Меркулов С.М., Корховой В.И., Копань В.П. Микроклональное размножение груши in Vitro // Физиология и биохимия культурных растений. 1994. - Т.26. - N 1- с.84-90.

9. S. Байраков В.В К вопросу использования клиноптилолиловых пород в растениеводстве // Научн. Конф. "Природные цеолиты »: Сб. тез. докл. -София- 1986,- с. 106-108.

10. Биотехнология растений: культура клеток. Перевод с англ. Негрука В. И.

11. М.: "Агропромиздат". - 1989. - 280 с.

12. Бленда В. Ф., Кириленко Е. Д. Регенерация черной смородины из апикальных меристем. - Физиология и биохимия культурных растений. - 1982. - т. 14. - № 3. - с. 244-247.

13. Бленда В. Ф., Калинин Ф. Л., Кириленко Е. Д. Фитогормональная регуляция сред при регенерации черешни in Vitro. - В кн.: Культура клеток растений и биотехнология: Тез. докл. IV Всесоюзн. конф. Кишинев, 1983, с. 105.

14. Бленда В. Ф. Адаптация подвоев косточковых культур, полученных из изолированных меристем. // Садоводство и виноградарство. 1994. - N 3. -с.36-38.

15. Брек Д. Цеолитовые молекулярные сита. М., Мир - 1976. - 778с. 14. Бургутин А. Б. Микроклональное размножение винограда / В кн.: Биология культивирования клеток и биотехнология растений. - М. - "Наука".1991, - с. 216-220.

16. Бургутин А. Б., Бутенко Р. Г., Катаева Н. В., Голодрига П. Я. Быстрое клональное размножение виноградного растения // с.-х. биология. - 1983. - №7, -с. 48-50.

17. У. Бутенко Р. Г. Применение метода культуры изолированных верхушечных почек для изучения процесса роста и органогенеза растений // Физиология растений. - 1960. - Т. 7. - вып. 6. - с. 715-723.

18. Бутенко Р. Г. Культура изолированных тканей и органов и физиология морфогенеза растений. М., "Наука", 1964, с. 91-272.

19. Бутенко Р. Г. Использование культуры тканей и клеток растений сельскохозяйственной науке и практике. - В сб. Современные проблемы плодоводства. М., 1977, с. 99-108.

20. QH. Бутенко Р. Г. Использование культуры тканей растений в сельскохозяйственной науке и практике. - "С.-х. биология", 1979, Т. 14, вып. 3, с. 306-316.

21. Бутенко Р. Г. Клеточные культуры: новый взгляд, новые технологии // Будущее науки, - М. 1983. - вып. 16. - с. 136-146.

22. Qi. Бутенко Р. Г. Технология in Vitro в сельском хозяйстве // с.-х. биология. - 1983,- №5, - с. 3-7.

23. Бутенко Р. Г. Индукция морфогенеза в культуре тканей растений // Гормональная регуляция в онтогенезе растений. - М., 1984. - с. 42-54.

24. Велчев В., Миланов Е. Регенерация на каллусни культури от прашници и плодници при ягодата // Градинарска и лозарска наука. - 1984. - Год. XXI. - № 2. - с. 29-35.

25. ЪО. Вердеревская Т. Д., Абраменко Н. М. Получение и ускоренное размножение безвирусного посадочного материала плодовых и ягодных1. ЧТОкультур II Садоводство, виноградарство и виноделие Молдавии. - 1984. - № 6, -с. 26-28.

26. Вердеревская Д.Д., Маринеску В.Г. Вирусные заболевания винограда в Молдавской сср и и методы получения безвирусного посадочного материала винограда// Садоводство, виноградарство и виноделие Молдавии. - 1972.-№2,-с.38-42.

27. Вимзане Л. Ф., Земите М. Э. Влияние сорта на размножение сорта in Vitro. - В кн.: Культура клеток растении и биотехнология. Тез. докл. IV Всесоюзн. конф. - Кишинев, 1983, с. 128.

28. Винклер Б. Н., Лайнер Б. Оздоровление картофеля от вирусов методом культуры меристем. - "Картофель и овощи", 1970, вып. 8, с. 9-10.

29. Вилцане Л. Ф. Размножение in Vitro (фрезия) // Цветоводство. - 1985. - № 1, -с. 9.

30. Выращивание безвирусного посадочного материала семечковых культур./ Рекомендации Госагропрома Каз. ССР. 1989. - 169с.

31. Высоцкий В. А. Действие некоторых регуляторов роста на изолированные меристеметические верхушки черной смородины // Плодоводство и ягодоводство нечерноземной полосы // Сб. научн. тр./ НИЗИСНП. - М., 1976. - т. 9. - с. 101-107.

32. Высоцкий В. А., Попов Ю. Г., Трушечкин В. Г. Регенерационная способность меристематических верхушек древесных растений in Vitro // Плодоводство и ягодоводство нечерноземной полосы // Сб. науч. тр. / НИЗИСНП. - М„ 1976. - т. 9. - с. 89-100.

33. Высоцкий В. А. Регеиерациониая способность изолированных верхушек черной смородины и вишни и методы получения из них целых растений: Автореф. дис. канд. биол. наук. -Л., 1978. - 21 с.

34. Высоцкий В. А., Поликарпова Ф. Я., Трушечкин В. Г. Использование 6-бензиламинопурина для размножения плодовых и ягодных растений // Регуляторы роста и развития растений. - М. - 1981. - с. 155-156.

35. Высоцкий В. А., Алехно Г. Д. Клональное микроразмножение роз // Декоративное садоводство Нечерноземья // Сб. науч. тр. / НИЗИСНП. - М. - 1985, -с. 59-67.

36. Высоцкий В. А. Усовершенствование способов получения растений малины из изолированных меристематических верхушек // Ягодоводство в тематических верхушках // Ягодоводство в Нечерноземье / Сб. науч. тр./ НИЗИСНП. - М. - 1984. - с. 3-8.

37. ЧН. Высоцкий В. А., Герасимова Н. В. Клональное микроразмножение в системе производства оздоровленного посадочного материала малины // Ягодоводство в Нечерноземье: Сб. науч. тр. НИЗИСНП. - М., 1989-1990. - с. 65-75.

38. Высоцкий В. А., Упадышев М. Т. Регенерация вегетативных органов листовыми дисками и другими эксплантатами рода Rubus in Vitro // Физиология растений. - 1992. - т. 38. - № 3. - с. 584-591.

39. Выхристова Г. И. Культура ткани - перспективный метод размножения селекционного посадочного материала луковичных и цветочных растений // Пути интенсификации промышленного цветоводства. - Сочи, 1981. - с. 7983.

40. Выхристова Г. И. Использование культуры тканей и органов для размножения нарциссов, гиппеаструма и тюльпанов // Повышение экономической эффективности промышленного цветоводства. - Сочи, 1983.с. 18-19.

41. Глоба-Михайленко И. Д. Использование метода культуры ткани в цитрусоводстве // Субтропические культуры. - 1983. - № 5. - с. 105-111.

42. Голодрига П. Я., Зленко В. А., Бутенко Р. Г., Левенко Б. А. Ускоренное размножение ценных генотипов винограда. - "Садоводство", 1982, вып. 3, с. 24-27.

43. Голодрига П. Я., Зленко В. А., Арзуманов В. А. Роль in Vitro в интродукции растений // Плодоовощное хозяйство. - 1985. - № 7. - с. 51-52.

44. Голошкина Н. А. Изучение регенерационной способности сортов люцерны. - В кн.: Культура клеток растений и биотехнология. - Кишинев, 1983, - с.84.52, Григоровский Ю. Н. "Адаптация" // Энциклопедия виноградарства. - т. 1,-Кишинев, 1986, - с. 32.

45. Гутиева Н.М. Размножение in Vitro персика. / Биология клеток растений in Vitro, биотехнология и сохранение генофонда; Тезисы докладов VII международной конференции. 1977,- М,- с.415-416.

46. Даскалов Г.Ж. Влияние природных цеолитов на рост, развитие и урожай хлопчатника / Научн. Конф. «Природные цеолиты »: Сб. София, 1986. -с.373-378.

47. QI. Дмитриева Н. Н. Проблема регуляции морфогенеза и дифференциации в культуре клеток и тканей растений // Культура клеток растений. - М., 1980. - с. 113-123.

48. GM. Дорошенко Н.П. Особенности первого этапа микро-клонального размножения винограда // Повышение эффективности производства винограда и продуктов его переработки Новочеркаск.-1987.-с.106-114.

49. X Дорошенко Н.П. Микроклональное размножение перспективных сортов винограда // Тез. докл. Всесоюзн. научно-техн. конф. "Применение благотехнологий в животноводстве, растениводстве и вет. медицине".-М.,1988.-е. 163-164.

50. С (>. Дорошенко Н.П. Микроклональное размножение перспективных сортов Агат Донской и Алан-1 // Виноградорство РСФСР в условиях переориентации отрасли.- Новочеркаск.-1988,- с.54-59

51. Дорошенко Н.П., Кострикин И.А. Клональное микро-размножение столового винограда сорта Агат-Донской // Садоводство и виноградорстъо.1989.-№3.-с.37-40

52. Дорошенко Н.П., Кострикин И.А. Селекция бессемянных сортов винограда с использованием культуры семяпочек in Vitro. // Виноград и вино России.- ,1992.-№1.-с.14-18.

53. Дорошенко Н.П. Биотехнология в виноградорстве // Виноград и вино Росси. -1992.-№3.-с.40-42.

54. Дорошенко Н.П., Полещук А.Ф. Создание маточника перспективных сортов винограда в совхозе "Россия" // Виноград и вино России.-1992.-№2.-с.21-22.

55. К,. Дорошенко Н.П. Защита винограда от хронической инфекции при его продолжительном культировании "in Vitro". // Виноград и вино России.-1996.-№1.-с.6-8.

56. Дорошенко Н.П. Повышение Регенерационной способности меристем при получении безвирусного материала винограда // Виноград и вино России,-1997.-№2-с.6-9.

57. Дорошенко Н.П. Оптимизация клонального микроразмножения винограда./ Биология клеток растений in Vitro, биотехнология и сохранение генофонда; Тезисы докладов VII международной конференции. 1977,- М.-с.395-396.

58. Ермишин А. П. Изучение каллусной культуры in Vitro пшеницы и ржи с целью использования в селекционно-генетических исследованиях. - Автореф. дис. канд. биол. наук. - Минск, 1980.

59. Жаркова И. В., Гефранова Л. И. Влияние некоторых факторов на микроразмножение земляники // Интенсивные способы выращивания посадочного материала садовых культур. - 1984. - с. 133-138.

60. ЪЧ- Зайцев Г. Н. Методика биометрических расчетов. - М.: Наука, 1973. - 256 с.$f. Зауралов О. А. Генетическая природа адаптации // Межвуз. сб. науч. тр. - Саранск, 1983. - с. 23-28.

61. Захаренкова И. А., Сучкова Н. К. Массовое размножение in Vitro сортов земляники мировой коллекции // Междунар. конф. "Биология культивируемых клеток и биотехнология": Тез. докл. - Новосибирск, 1988. - ч. 2. - с. 315316.

62. Зленко В.А., Трошин Л.П., Котиков И.В. Размножение винограда методом in Vitro. Часть 2. Развитие растений in Vitro и их адаптация к условиям in Vivo // Виноград и вино России. 1998.-№ 5,- с.36-30.

63. S3. Иванова Н. В., Козицкий Ю. Н. Применение культуры изолированных тканей для размножения лилии // Бюлл. ГБС АН СССР. - М. - 1981. - вып. 121, -с. 87-92.

64. Иванова И. Физиологические основы микроклонального размножения растений. // Межд. Агропр. Журн. 1990ю - N 3. - с.35-40/1. ЛО А

65. Изворска Н. Влияние экзогенных ауксинов и цитокининов на морфогенез меристематической ткани различных растений. - Физиология растений. - София, 1980. - т. 6. - № 3. - с. 99-106.

66. Ильенко И. И., Редько В. И., Павловская Л. Л. Микроволновое размножение и перевод стерильной культуры сахарной свеклы в грунт // Селекция и семеноводство. - 1985. - № 59. - с. 27-29.

67. Калашникова Е.А. Методы совершенствования технологии клонального микроразмножения сосны обыкновенной. // Лесное хозяйство. 1994. - с.36-38.

69. Катаева Н. В., Бутенко Р. Г. Клональное микроразмножение растений. - М.: Наука, 1983. - 96 с.3?. Катаева Н. В. Культура тканей и органов фрезии // Физиология растений. - 1981, -вып. 28, -с. 1062-1064.

70. Катаева Н. В., Аветисов В. А. Клональное размножение растений в культуре ткани. - В кн.: Культура клеток растений. - М. - 1981. - с. 137148.

71. Клоконос Н. П., Соловьева Н. И. Размножение малины методом культуры тканей // Вестник с.-х. науки Казахстана. - 1986. - № 9. - с. 44-47.

72. Клоконос Н.П. Получение безвирусных клонов ягодных культур. // Садоводство и виноградарство. 1994. - N 4. - с.13-14.лог

73. Коев Г.В., Полинковский А.И. Применение нематицидов в борьбе с нематодами переносчиков вирусов в Молдавии. - В кн.: VIII Всесоюзное совещание по нематодными болезнями сельскохозяйственных культур. -Кишинев,- 1976.-е. 140-141.

74. Колесниченко В.М., Веретенников A.B. Культура тканей и клонирование гибридов ореха.//Изв. Вуз. Лесн. Журн. 1994. -N 4. - с.40-42.

75. Козарь Д.Г. Роль биотехнологии в повышении урожайности сельскохозяйственных культур.- Днепропетровск. 1987. - 32с.

76. Козицкий Ю. Н., Деревянкин П. В., Помазков Ю. И. Получение гвоздики из меристематических верхушек // Плодоводство и ягодоводство нечерноземной полосы // Сб. науч. тр. / НИЗИСНП. - М., 1976. - т.9. - с. 108-114.

77. Кондо И. Н., Ковалева Л. В. Влияние стимуляторов роста на корнеобразование у виноградных черенков // Изв. АН Уз. ССР. - 1952. - № 2. - с. 28-36.

78. Ht- Кочеткова Н. И., Алешкевич Л. В., Кочетов Ю. В. Особенности регенерации растений крыжовника в условиях in Vitro // Вестник с.-х. науки. - 1981,-№2, -с. 80-82.

79. Кравцов П. В., Кравцова Л. В. Культура изолированных зародышей и перспективы ее использования в селекции плодовых растений // Биофизические и физиолого-биохимические исследования плодовых и ягодных культур. - 1974, -с. 15-21.лп-т

80. Кузина Т. В. Стимуляторы и ингибиторы роста у черной смородины на протяжении вегетации при различной длине дня. // Физиология растений. - 1970, т. 7, вып. I, с. 76-82.

81. Кулаева О. Н. Цитокинины, их структура и функции. - М., "Наука", 1973 -264 с.

82. Г. Кривенцов В. И. Биохимические методы оценки адаптации растений к некоторым экстремальным факторам среды // Сб. науч. тр. / ГНСБ. - 1985. - т. 95, - с. 43-46.

83. Кушнир Г. П., Будак В. Е. Опыт клонального микроразмножения орхидей // Охрана и культивирование орхидей. - Киев, 1983. - с. 84-86.

84. НУ. Лавренева А. Н. Разработка клонального микроразмножения цимбидиума методом культуры ткани // Уровни организации процессов у растений. - Киев, 1981. - с. 97-101.

85. ПР. Лапчик В. Ф., Глеба Д. М., Струницкий В. А., Цап В. М. Использование

86. М^МсЭа. Ky/)k rnyfxn m к л не-¿i ciwcy^fPto ^ 9 ofeojc-eftw и^^р (и ^ ¿ч/то тч-енцр/ реЭк^уисчезающих лекарственных и дикорастущих видов растений // Охрана, изучение и обогащение растительного мира. - 1984. - вып. 11. - с. 113-118.

87. Лазаревский М. А. Изучение сортов винограда. - Ростов-на-Дону: Изд. Ростовск. Унив-та, 1963. - 152 с.

88. Литвак А. И., Кузьменко А. П., Гузун Н. И. Клональное размножение винограда: технология и перспектива широкого применения: Рукопись докл. на совещ. по биотехнологии. - М., 1987. - 6 с.

89. Литвак А. И. Состояние и координация биотехнологических и смежных с ними исследований в виноградарстве // Виноградарство и виноделие СССР. - 1989, -№2, -с. 76-82.

90. Лунева Л. С. Размножение ирисов методом культуры апикальных меристем in Vitro // Ботанический журнал. - 1977. - т. 62. - № 3. - с. 416421.

91. Максимов В. Н. Многофакторный эксперимент в биологии. - М.: Изд. МГУ, 1980. - 280 с.

92. Максимов В. Н. Планирование эксперимента в биологии и сельском хозяйстве. - М.: Изд. МГУ, 1991. - 302 с.

93. Милкус Б.Н. Xiphinema index переносчик вируса короткоузлия винограда // Защита растений.- 1977,- №5,- с.54-55.

94. Момот Т.С. Технология изолированных культур для микроразмножения лесных древесных растений. / Биология клеток растений in Vitro, биотехнология и сохранение генофонда; Тезисы докладов VII международной конференции. 1977,- М,- с.441-442.

95. Методика определения экономической эффективности использования в сельском хозяйстве результатов научно-исследовательских работ, новой техники, изобретений и рационализаторских предложений // Рекомендации НТИ МСХ СССР. - 1979. - № 7. - с. 76.

96. Мещерякова Н. И., Бажанов В. Ф. Гормональная регуляция побегообразования в изолированной культуре апикальных меристем розы эфиромасленичной // Регуляторы роста и развития растений. - М., 1981. - с. 166-167.

97. Митрофанова О. В., Зленко И. Л., Воронова И. В., Соболева Л. Е. Технология получения безвирусного материала хризантем // Экспресс-информация / Серия: озеленение населенных мест. - 1984. - Вып. 8. - № 4. - 16 с.

98. Митрофанова О. В., Зленко И. Л., Соболева Л. Е., Феофилова Г. Ф. Получение безвирусного посадочного материала хризантем // Цветоводство. - 1985,-№4, -с. 11-12.

99. Некрасова Т. В. Культура изолированных почек плодовых растений // Физиология растений. - 1964. - т. II. - с. 127.

100. Нечипоренко В. И. Применение методов меристемы в цветоводстве // Инф. бюлл. - 1973. - с. 36-40.

101. Новикова В. М., Работягов В. Д. Получение растений в культуре изолированных почек амфигаплоида лаванды. - В кн.: культура клеток растений и биотехнология. - Тез. докл. .IV Всесоюзн. конф. - Кишинев, 1983.с. 145.

102. Насимов А. 3., Зленко В. А. Совершенствование способов адаптации растений винограда, размноженных методом in Vitro II Материалы научн. конф. молод, учен, и спец. Казахстана, посвящ. 70-летию Великой Окт. соц. рев. - Алма-Ата, 1987. - с. 39-40.

103. Попов Ю. Г., Трушечкин В. Г. Получение растений земляники методом культуры изолированных верхушек побега // Плодоводство и ягодоводство нечерноземной полосы / Сб. научн. тр. НИЗИСНП. - М., 1972. - с. 184-193.

104. Руте Т. Н., Мауриня X. А. Размножение растений огурца в культуре in Vitro. - В сб.: Культура клеток растений и биотехнология. Тез. докл. IV Всесоюзн. конф. - Кишинев, 1983. - с. 90.

105. Розенберг В. Р. Факторы, влияющие на регенерацию растений картофеля из меристемы. - В сб.: Культура клеток растений и биотехнология. - Кишинев: "Штинница", 1983. - с. 139.

106. Сафразбекян С. А., Урманцева В. В., Катаева Н. В. Роль сахарозы в регуляции морфогенеза каперса in Vitro // Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. -М.: Наука, 1991. - с. 192-196.

107. Q02. Стаканова Р. В., Абраменко Н. М. Ускоренное размножение подвоев яблони в асептических условиях // Садоводство, виноградарство и виноделие Молдавии. - 1984. - № 6. - с. 29-31.

108. НО. Трушечкин В. Г., Высоцкий В. А. Клональное микроразмножение подвоев и сортов вишни // Информационный листок. - 1985. - № 66. - 4 с.

109. Трушечкин В. Г., Высоцкий В. А., Алехно Г. Д. Клональное микроразмножение промышленных сортов розы // Информационный листок. - 1985. -№27-86, -4 с.

110. Турецкая Р. X. Физиология корнеобразования у черенков и стимуляторы роста. - М.: Изд. МГУ, 1961. - с. 9-12.

111. Турецкая Р. X., Поликарпова Ф. Я., Вегетативное размножение растений с применением регуляторов роста. - М.: Наука, 1968. - с. 16-24.

112. Турецкая Р. X., Кефели В. И., Саидова С. А. Действие природных и синтетических ингибиторов на разные формы роста // Физиология растений, 1969. - т. 16. - вып. 5. - с. 825-831.

113. Турецкая Р. X., Гуськова А. В. метаболизм и механизм действия фитогормонов. - В сб.: Труды Всесоюзн. конф. - Иркутск, 1979. - с. 21-27. 2 76. Уоринг Ф., Филлипс И. Рост растений и дифференцировка. - М.: Мир, 1984, -512 с.

114. Уайт Ф. Р. Культура растительных тканей. - М.: ИЛ, 1949. - 159 с. Ш. Федюнкин Д. В., Головнева Н. Б., Кошелева Л. Л., Бахнова К. В. Интенсивная культура растений в искусственных условиях. - Минск: Наука и техника, 1984. - 214 с.

115. ИЗ. Фадеева Т. С., Лутова Л. Н., Козырева О. Г., Брач Н. В. О роли фитогормонов в регуляции процессов регенерации генетически разных форм. - В кн.: Регуляторы роста и развития растений. Тез. докл. I Всесоюзн. конф. - М., 1981, -с. 178.та

116. Ю. Хасси Г. Размножение сельскохозяйственных культур in Vitro. - В кн.: Биотехнология сельскохозяйственных растений. - М.: Агропромиздат, 1987.с. 105-133.

117. Abdallah B.F., Fnayou A., Grenau S., Ghorbel A. Contribution â l"amélioration du microgreffage de la vigne // Bulleten de E"O.J.V. 1996. - № 785-786. - P. 601615.

118. Vf.Baumann G. Möglichkeiten und Grenzen der Virusfreimachung von Himbeeren durch Gewebekultur // Obstbau /Bonn/. 1981. -Jg. 6. - 1 3. - S. 88-89.

119. Blach R. recheches sur les cultures de meristemes et d"organes de Vigne in Vitro en vue de la sélection et de la conservation de genetipes // Bulletin de l"O.J.V. 1985. -№650-651.-P. 391-395.

120. W-Braser L.G., Harvey C.F. Somatic embryogenesis from anther-derived callus in two Actinidia species // Sei. Hort. (Neth). 1986. - v. 29. - 1 4. - P. 335-346.

121. SO. Broome O.C., Zimmerman R.H. In vitro propagation of blackberry // Hort. Sei. -1978.-v. 13. -№ 2. P. 151-153.

122. Buchala A.J. Pythoud F. Vitamin D and related compounds as plant growth substances I I Physiol. Plant. 1988. - № 2. - P. 391-396.

123. S. Buchala A.J., Schmid A. Vitamin D and its analogues as a new class of plant growth substances affecting rhisogenesis // Nature. 1979. - v. 280. - 1 571a. - P. 230231.

124. Cheema G.S. Sharma D.P. In vitro propagation of apple // Plant Cell Cult, in Crop Improvement: Plenum Press. 1983. - P. 309-307.2Si Chu C.C. in Proceedings of Symposium on Plant Tissua Culture- Science Press, Peking.-1978.-P.43.

125. Clark M.F., Adams A.N. Characteristics of the microplate method of imzumelinked immunosorbent assay for the detection of plant viruses // J. Gen. Virol. 1977. - v. 34.-№3.-P. 475-483.

126. Fallot J. La culture in Vitro des organes, tissus et cellules de Vigne. Interet et perspectives d"application pour la multiplication //1 Coll. Jnt. sur la Multiplication de la Vigne. 1982. - P. 32-37.

127. Fang G., Liang H. Изучение значения обработки холодом на эффективность культуры пыльников риса // Чжиу шэнли сюэбао, Acta Phytophysiol. Sin. 1985. v. 11.-M.-P. 366-380.

128. Girmen M., Zimmer K. In vitro-Kultur von Galantus elwesii. Regeneration bei verschiedenen pH-Werten, Kohlenhydraten und Umweltbedingungen // Gartenbauwissenschaft. 1988. - B. 53. - 1 2. - S. 51-54.

129. Gland A., Lichter R., Schweiger H.-G. Genetic and exogenous factors affecting embryogenesis in isolated microspore cultures of Brassica napus L. // J. Plant Physiol. 1988. - v. 132.- 1 5. - P. 613-617.

130. Golosin B., Radojevic L. Micropropagation of apple rootstocks // Acta Horticulturae. 1987. - v. 2. - 1 212. - P. 589-594.

131. Si".Grenan S. et Vlut C. Incidences de la thermotherapie in Vito sur les caractéristiques de production de quelques variétés de Vitis vinifera L. // Bulletin de l"O.J.V. -1992. № 709-710. -P.155-162.

132. Ж.Gu S., Gui Y., Xu T. Действие физических и химических факторов на частоту индукции растеньиц из пыльцы, изменения в образовании крахмала в пыльниках // Чжиу сюэбао, Acta Bot. Sin. 1984. - v. 26. -1 2. - P. 156-162.

133. Hamoui M. Culture in Vitro de la feverole (Vicia faba minor): bouturage, callogenese, organogenes // These, Montpelier. 1981.-318 p.

134. Harada H., Kyo H., Imamura J. Induction of embryogenesis and regulation of the developmental pathway in immature pollen of Nicotiana species // Curr. Top. Dev. Biol. 1986.-v. 20.-P. 397-417.

135. Harper P.C. Tissue culture propagation ot blackberry and tayberry // Hort. Res. -1978.-v. 18.-P. 141-143.

136. Hassani Z. Le microgreffage in Vitro. Une de ses application en viticulture: Etude de l"incompabilité entre quelques port-greffes et la variété Grenache (Vitis vinifera) // D.A.A., ENSAM. 1987. - 70 p.

137. Hassani Z. Influence del"acide beta-indole-butyrigue (A.I.B.) sur le comportement des microgreffes de Vigne cultivées in Vitro // Progresse Agricole, Viticulture. 1990. -№ 1990.-P.375-379.

138. Hauser В., Geiger E.-M., Horn W. Eignung von Gellan und verschiedenen1. ЛЛ 4

139. Agarqualitaten für Gewebekulturen von Kalanchoe Hybriden // Gartenbauwissenschaft. 1988. - B. 53. -1 4. -S. 166-169.

140. He D., Ouyang J. Изучение андрогенеза при культивировании пыльников пшеницы на стадиях мейоза, тетрады, ранней одноядерной и трехядерной пыльцы // Чжиу сюэбао, Acta bot. sin. 1995. - v. 27. - № 5. - P. 469-475.

141. Hedtrich C.M., Feucht W., Schimmelpfeng H. Pathogeneiiminierung und Vermehrung von Himbeeren durch Meristemspitzen-Kulturen // Erwerbsobstbau. -1980. B. 22. -№ 7. - S. 159-163.

142. Herler P.K., Palevitz B.A. Microtubules and microfilaments // Ann. Rev. Plant. Physiol. 1974. - v. 25. - P. 309. 5® A Huth H. Kultur von Himbeerpflanzen aus apikalen Meristem //

143. ЪоЬ. James D.J. The role of auxins and phloroglucinol in adventicious root formation in

144. M^.Ke S., Skirvin R.H., McPheeters K.D. Otterbacher A.G., Galletta G. In vitro germination and growth of Rubus Seeds and embryos // Hort. Sciense. 1985. - v. 20.-P. 1047-1049.

145. Keqin P., Duijng H. A kinetic study of potassium Alteraanthera philoxeroides // J. PlantNutr.-1987.-v. lO.-^.-P. 1983-1990. Iff- Kiss F., Zatyko J. Vegetative propagation of Rubus species in vitro // Bot. Kozlem. -1978.-v. 65.-P. 65-68.

146. Klaine S.J. Influence of thidiazuron on propagule formation in Hydrilla verticillata // J. Aquat. Plant Manag. 1986. -v. 24. - P. 80-82.

147. Kodandaramaiach J., Venkataramaiach C. Eau P.C. Rao K.N. Effect of B group vitamins on tlie endogenous cytokinin levels of cluster bean (Cyamopsis tetragonoloba) // Proc. Nat. Acad. Sci. (India). 1984. - v. 54. - № 2. - P. 95-98.

148. Leike H. Somaclonale Variation, Grenzen und Möglichkeiten direkten Nutzung in der Pflanzungzuchtung // Gartenbau. 1988. - Jg. 35. - № 6. - S. 167-169.

149. Martin С., Vernoy R., Carre M., Vesselle G., Collas A., Bougerey С. Vigne et ,techniques de culture in Vito. Quelques résultats d"une collaboration entre recherche publiqu et entreprise privée // Bulletin de l"O.J.V. 1987. - № 675-676. - P.447-458.

150. Martin C. et Collas A. De la culture in Vitro a la production de greffes-soudés issusdu greffage herbacé de la Vigne // Progrès Agricole et Viticole. 1992. - № 109(3).-P.61-68.

151. Martinez J. Sur les différents combinaisons de greffages des apex realises in Vitro entre Pecher, Abrocotier et Myrobolan // Centre Rech. Acad. Sci. 1979. - № 288. -P.759-762.

152. Vi Morel G. La culture des meristemes caulinaires // Bulletin Soc. fr. physiol. Veg. -1965.-V. 11, № 3. -P.64-67.

153. Ш Mullin R.H. et Schlegel D.E. Cold storage maintenance of strawberry meristem plantlets // Hortscience, 1976. - № 11. - P. 100-101.

154. JYj.Murashige T. Clonal crops through tissue culture // Springer-Verlag Berlin Heidelberg. -1977.

155. Murashige T., Skoog F. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobaco tissue cultures // Physiol., Plantarum. 1962. - v. 15. -1 3. - P. 473-497.

156. JV2. Nitsch J.P., Hitsch C. Hapioid plant from pollen grains // Science. 1969. - v. 163. - 3862.-P. 85-87.

157. W. Nozeran R., Bancilhon L. Les cultures in Vitro en tant que technique pour approche des problèmes poser l"amélioration des plantes // Ann. Amel. Plantes. 1972. - № 22(2). -P.167-185.

158. O. Nozeran R., Grenan S., Truel., Favre J. Morphogenese a partiz du stade juvenile de Vitis vinifera L. ussue de grane ou de culture in Vitro // Agronomi. 1983. - № 3(7). - P.681-684.

159. TJ. Pat. 225439 AI, DDR. Trager fur Nahrmedium in der pflanzlichen in vitro-Kultur /

160. Fehrsuhn G. Fritze G. 31.07.85. C 12 N 5/00. ■fr. Pat. 247232, DDR. Verfahren zur Erhaltung und Vermehrung von Pflanzen /

161. Rev. bras. bot. 1985. - v. 8. - № 2. - P. 143-147. jn.Predieri S., Malavasi F., Fasolo F. High-frequency shoot M26 (Malus pumila Mill.) //

162. HortScience. 1981. - v. 16. - P. 308-309. №. Ramaiach J.K., Reddy K.B., Kumar P.J. Uptake of major elements influenced by B-vitamins in green gram (Vigna radiata L.) // Proc. Nat. Acad. Sei. (India). - 1989. -v. 57.-№3.-P. 303-308.

163. Rosati P., Devreux M., Laneri U. Anther culture of strawberry // HortScience. -1975,-v. 10.-№2.-P. 119-120.

164. Shivanna K.R. In vitro fertilization and seat formation in Petunia violacea Lindi // Phytomorph. 1965. - v. 15. - P. 183-185.

165. J 72. Silva D.L.R., Cox P.C., Hetherington A.M. Mansfield T.A. The role of abscisic acid and calcium in determining the beha viour of adaxial and abaxial stomata // New Phytol. -1986. v. 104.-№ 1.-P. 41-51.

166. Silva D.L.R., Hetherington A.M., Mansfield T.A. Synergism between calcium ions and abscisic acid in preventing stomatal opening // New Phytol. 1985. - v. 100. -№4.-P. 473-482.

167. U. Snir J. Micropropagation of red raspberry I I Scientia Horticulturae. -1981.-v. 14. -№2.-P. 139-143.

168. Suvarnalatha G., Swamy P.M. Interaction of Ca and calmodulin antagonist CPZ on mitochondrial Ca ATP-ase activity of cowpea leaf discs during senescence // Curr. Sei. (India). 1988. - v. 57. - 1 9. - P. 497-499.

169. Svobodova I. Elimination of viruses by means of callus tissue culture // Proc. Intern. Conf. Plant Viruses. Wegeningen, 1966. P. 48-53.

170. Praxisanwendung // Rheinische Monatsschrift. 1983. - Jg. 71. - № 2. - S.52-54. in. Theiler R. Einsatz der Gewebekultur zur Anzucht pathogenfreier Pflanzen; Möglichkeiten und Probleme ihrer Anwendung // Erwerbsobstbau. - 1980. - Jg.22.-S. 226-231.

171. Я. Valat С., Grenan S., Auran G., Bonnet A. Guerison de quelques maladies a virus de la Vigne par thermotherapie de plantiles cultivées in Vitro // Vignes Vins. 1979. -№ 284. - P. 19-22.

172. Valat C., Grenan S., Auran G. Thermotherapis in Vitro: premieres observation sur les aptitudes de quelques variétés de porte-greffes et de Vitis vinifera traites // Vignes Vins. 1981. -№ 298. - P. 17-23.

173. Vf- Vàng S.Y., Ji Z.L., Sun T., Faust H. Effect of tihidiazuron on abscisic acid content in apple bud relative to dormancy // Physiol. Plant. 1987. - v.71. - 1 1. - P. 105109.

174. Vertesy J. Experiments on the production of virus free raspberry propagation material by meristem culture // Acta Hortic. 1979. - v. 95. - P. 77-81.

175. Welander M. In vitro culture of raspberry (R. idaeus) for mass propagation // J. Horticultures Science. 1987,- v. 60. - 1 4,- P. 493-499.

176. Welander M. In vitro culture of raspberry (Rubus idaeus) for mass propagation and virus elimination // Acta Horticulturae. 1987. - v. 2. - № 212. - P.610.

177. Hoi. Велчев Е., Стоянов С., Миланов Е. Размножаване на безбодилестата къпина in vitro. 2. Вкореняване на микроразмножени от сорт Торнфи // Градинарска и лозарска наука. 1983. - Т. 20. - № 7. - С. 16-23.

178. Welsh K.J., Sink. К.С. Morphogenetic responses of Browallia leaf sections and callus I I Ann. Bot. 1981. - v. 48. - № 5. -P. 583-590.

179. Чох White P.R. The cultivation of animal and plant cells. 2 nd ed. Ronald Press Co., New York.- 1963.4öS. Zatyko J.M., Simon I. In vitro culture of ovaries of Rubus species I I Acta Agronom. Acad. Scient Hung. 1975. - v. 24. - № 3/4. - P.277-281.

180. Чоь, Zenkteler M. Test-tube fertilization of ovules in Melandrium album Mill, with pollen grains of several species of the Caryophylaceae family // Experientia. 1967. - v. 23 .-№9.-P. 775.

181. Абдулаев И.К., Тагиев С.Б. Влияние гиббереллина на урожайность и содержание сахара в ягодах у сорта винограда Танквери в производственных условиях // Докл. АН АзССР. 1971. - Т.27, №2. - С. 82-85.

182. Абдулаев И.К.,Тагиев С.Б. Установление наилучших доз и сроков опрыскивания водным раствором соцветий сорта винограда Кишмиш розовый // Труды института генетики и селекции АН АзССР. 1974. - Т.7. - С.93-97.

183. Агафонов Н.В., Фаустов В.В. Способы повышения завязывания плодов у садовых растений. М.: 1975. - 52 с.

184. Абрамишвили Т.И. Влияние гиббериллина на изменение некоторых вторичных веществ в соцветиях виноградной лозы //Вестн. Груз, ботан. о-ва. -1972. №5. - С.28-38.

185. Болгарев П.Т., Мананков М.К. Влияние гиббереллиновой кислоты на отдельные органы виноградного растения // Гйббереллины и их действие на растения. - М.: Изд - во АН СССР, 1963. - С.245 - 252.

186. Бродниковский М.Н., Сханов З.С. Влияние гиббереллина на урожай винограда в условиях богары // Сельское хоз - во Таджикистана. - 1970. - №11. -С.53 -55.

187. Вангай Е.В. Гиббереллин и урожай винограда // Труды Чикментской обл. с. - х.опытн.станции. - 1969. - Т.З - С.86 - 88.

188. Вербина A.A. Изучение влияния различных стимуляторов роста на завязывание и развитие ягод винограда // Резервы повышения урожая с. - х. культур. - Одесса. - 1968. - С.207 - 210.

189. Галиченко Н.Б. Химические регуляторы ускоряют созревание плодов и ягод. - М.: Садоводство. 1975. - №4. - С.60 - 61.

190. Гамбург К.З. Кинетический анализ взаимодействия гиббереллина и ауксина // Гиббереллины и их действие на растения. - М.: Изд - во АН СССР. 1963, -С.194 -204.

191. Гамбург К.З. Взаимосвязь действия гиббереллина с ауксином // Регуляторы роста и рост растений. - М.: Наука. 1964. - С.77 - 100.

192. Гамбург К.З. Физиология действия гиббереллина на вегетативный рост растений // Регуляторы роста и рост растений. М.: Наука, 1964. - С.

193. Гамбург К.З. О возможных связях действия гиббереллина с обменом нуклеиновых кислот // Регуляторы роста растений и нуклеиновый обмен. - М.: Наука. - 1965. - С.48 - 56.

194. Гамбург К.З. Фитогормоны и клетки. - М.: Наука. - 1979. - С. 103.

195. Гвамичава Н.Э., Чичиашвили И.В. Динамика активности эндогенных регуляторов роста в однолетних побегах винограда сорта Горули мцване // Сообщ. АН ГрузССР. - 1982. - Т.108. №1. - С.153 - 156.

196. Гукасов А.Н., Малышева Т.Ф. Влияние гиббереллина на продуктивность некоторых сортов винограда // Труды института (Кубанский с.х. ин - т). - 1969. - вып. 21. - С.64 - 70.

197. Гукова М.М., Фаустов В.В. О взаимосвязи действия на растения гиббереллина и гетероауксина // Гиббереллины и их действия на растения. - М. - Изд - во АН СССР. - 1963. - С. 139 - 142.

198. Голинка П.И. Гиббереллины в пасоке винограда // Физиология и биохимия культурных растений. - 1973. - Т.5,вып.З. - С.321 -324.

199. Дзагнидзе Ш.Ш., Чанишвили Ш.Ш. Онтогенетическое изменение эндогенных фитогормонов в органах побега виноградной лозы // Сообщ. АН ГрузССР. - 1985. - Т.119, №3. - С.601 - 604.

200. Дзагнидзе Ш.Ш. Фитогормоны и ингибиторы роста в связи донорноакцепторными отношениями в виноградной лозе: Автореф. дисс. на соискание учен степени канд.биолог.наук. - Москва. - 1986. - 24с.

201. Джамалитдинов X., Дунаев В. С. Результаты применения ниббереллина на виноградной лозе в условиях Ура - Тюбинского района // Тематич. сб. научн. трудов НИИ садоводства и виноградорства им. Мичурина.

202. Душанбе. - 1972. - С.61 - 65.

203. Доспехов Б.А. Методика полевого опыта. - М.: Агропромиздат. - 1985, -С.351.

204. Ермолаева Е.Я., Козлова H.A., Бельденкова А.Ф. Действие гиббереллиновой кислоты на формирование хлоропластов и фотосинтез // Гиббереллины и их действие на растения. - М. - Изд - во АН СССР. - 1963. -С.143 - 155.

205. Живухина Г.М., Балыкова М.А. Влияние гиббереллина на активность фитогормонов и темпы роста растений // Рост растений и пути его регулирования. - М.: 1978. - С.10 - 19.

206. Захрабян Н.Р. Динамика эндогенных регуляторов роста в побегах новых сортов винограда в различные периоды покоя // Биолг. журн. Армении.1985. - Т.38, №6. - С.493 - 498.

207. Иванова В.А. К вопросу о действии и последствии гиббереллина на виноград // Научн. Зап. Воронежского отд. Всес. ботан. о -ва. - 1968. - С.4955.

208. Каланов Б.Ш. Влияние гиббереллина на анатомическую структуру гребня грозди // Узбек, биол. журнал. - 1963. - №4. - С.31 - 34.

209. Каланов Б.Ш. Динамика формирования проводящей системы гребня, соцветия и грозди // Виноделие и виноградорство СССР. - 1965. - №2. - С.37 -39.

210. Каланов Б.Ш., Молчанов B.JI. Разнокачественность цветков и соцветий как причина массового осыпания цветков и завязей у винограда // Труды НИИ СВ И В им. акад. P.P. Шредера. - Т.ХХХ1П. - Ташкент. - 1971.51.

211. Калинин Ф.Л. Билогическиа ктивные вещества в растеневодстве. - Киев. - "Наукова думка". - 1984. - С.315.

212. Карабанов И.А. К вопросу о действии гиббереллина на содержание хлорофилла в растениях //Физиология растений. - 1968. - Т. 15. - вып.6. - С.1068 - 1070.

213. Карабанов И.А. О завязывании черной смородины под действием гиббереллина // Ботаника (исследования). - Вып.И. - 1969. - С.64 - 72.

214. Карабанов И.А. Витамины и фитогормоны в жизни растений. - Минск: Урожай. - 1977. - С. 110.

215. Коваль Н.М., Страхов В.Г., Седлецкий В.А., Хреновсков Э.И. Эндогенные стимуляторы роста винограда // Садоводство, виноградарство и виноделие Молдавии. - 1983. - №9. - С.53-54.

216. Кочерженко И.Е., Мойко Т.К. О роли естественных гиббереллинов в фотопериодической реакции персика и винограда // Докл. АН СССР. - 1967.

217. Т. 177. -№3. - С.720 - 723.

218. Катарьян Т.Г., Дробоглав М.А. Влияние гиббереллиновой кислоты на виноград // Виноградарство и садоводство Крыма. - 1960. - С.8 -10.

219. Катарьян Т.Г., Дробоглав М.А, Давыдова М.В. Влияние гиббереллтна на разные сорта винограда // Физиология растений. - 1960. - Т.7. - Вып.З.1. С.345 -348.

220. Катарьян Т.Г., Дробоглав М.А., Давыдова М.В. Гиббереллин и плодоношение винограда // Труды(Всес. научн. - исслед. ин - та виноделия и виноградорства "Магарач"). - 1963. - Т.12. - С.100 - 127.

221. Катарьян Т.Г., Чайлахян М.Х, Дробоглав М.А. и др. Влияние гиббереллина на плодоношение разных сортов винограда // Гиббереллины и их действие на растения. - М.: АН СССР. - 1963. - С.217 - 225.

222. Коверга A.C. К вопросу о использовании гиббереллиновой кислоты для повышения урожая плодовых культур и винограда // Тр. Никитского бот. сада. - 1970. - Т.46. - С. 95 - 107.

223. ЛиловД., Николова Е., Ауксины. Образование цветов и ягод винограда // Физиология растений. - 1976. - Т.23. - Вып.2. - С.380 - 384.

224. Лилов Д., Христов X. Содержание свободных и связанных гиббереллиновых веществ в цветках и плодах винограда с различнымицветообразованием и плодообразованием //Физиология растений. - София: 1978. - Т.4. - В. 1. - С.61 - 67.

225. Лудникова Л.А. Определение ростовых веществ в завязях семенного и партенокарпического сортов винограда // Применение физиологоактивных веществ в садоводстве. - М.: ВАСХНИЛ - 1974. - С. 187 - 191.

226. Максимов Г.Б., Полевей В.В., Радкевич Г.Н., Логвенкова Л.П. Гиббереллиноподобные вещества в тканях высших растений // Регуляторы роста и рост растений. - М.: Наука. - 1964. - С.53 - 76.

227. Мананков М.К. Стимуляция плодоношения у винограда // Виноградарство и садоводство Крыма. - 1969. - №2. - С. 10 - 14.

228. Мананков М.К. Установление оптимальных концентраций, сроков и способов обработки винограда гиббереллиновой кислотой //Гиббереллины и их действие на растения. - М.: АН СССР. - С.226 - 234.

229. Мананков М.К. К вопросу о применении гиббереллина на разных сортах винограда // Физиология растений. - 1970. - Т.17. - Вып.4. - С.726730.

230. Мананков М.К., Доровлева Л.М. Влияние гиббереллина на пигментный комплекс листьев винограда // Применени физиологическиактивных веществ в садоводстве. - М.: ВАСХНИЛ. - С. 128136.

231. Мананков М.К. Влияние гиббереллина на некоторые физиологические процессы винограда // Физиология и биохимия культурных растений. - 1975.

232. Т.7. - Вып.З. - С.301 - 305.

233. Мананков М. К. Некоторые вопросы теории и практики применения гиббереллина в виноградарстве // Применение физиолого активных веществ в садоводстве. - М.: ВАСХНИЛ. - С. 128-136.

234. Мананков М. К. Влияние гиббереллина на морфогенез соцветия винограда // Научн. докл. высш. школы Биол. науки. - 1975. - № 8. - С. 7378.

235. Мананков М. К. Роль гиббереллина // Садоводство. - 1976. - № 9.1. С. 31-32.

236. Мананков М. К., Смирнов К. В. Применение гиббереллина в виноградарстве // Итоги науки и техники (Растениеводство). - 1979. - С. 5095.

237. Мананков М. К. Физиология действия гиббереллина на рост и генеративное развитие винограда. Автореферат дисс. на соискание учен, степени докт. биол. наук: . Киев. - 1981. - 32 с.

238. Махмуд X. М. Изучение влияния гиббереллина на эндогенные регуляторы роста и качество плодов винограда. Автореф. дисс. на соискание учен, степени канд. биол. наук: . Ташкент, 1977. - 24 с.

239. Мелкоян Л. С., Саркисова М. М, Изменение содержания эндогенных регуляторов роста в побегах винограда // Виноделие и виноградарство СССР.1974. - № 5. - С. 59-61.

240. Мехти-Заде Р. М. Влияние гиббереллина на рост и развитие гроздей и ягод и на некоторые физиологические процессы у бессемянных сортов // Гиббереллины и их действие на растения. - М.: АН СССР. - С. 241-244.

241. Мержаниан А. С. Виноградарство // М.: Колос. - 1967. - 464 с.

242. Митрофанов Б. А., Оганенко А. С. Влияние физиологически активных веществ на интенсивность фотосинтеза // Гиббереллины и их действие на растения. М.: АН СССР. - 1962. - С. 156-160.

243. Муромцев Г. С., Агнистикова В. Н. Гормоны растений гиббереллиныы. - М.: Наука, 1973. - 270 с.

244. Муромцев Г. С., Корнева В. М., Герасимова Н. М. Гиббереллины и рост растений // Рост растений и природные регуляторы. - М.: Наука. - 1977.1. С. 193-213.

245. Муромцев Г. С., Агнистиковаа В. Н. Гиббереллины. - М.: Наука. - 1984, -208 с.

246. Негруль А. М. Виноградарство и виноделие. - М.: Колос. - 1968. -512 с.

247. Негруль А. М, Гордеева Л. Н., Калмыкова Т. И. Ампелография с основами виноградарства. -М.: Высшая школа. - 1979. - 400 с.

248. Найденов Л. Н. К вопросу физиологии окольцованного виноградного побега // Садоводство, виноградарство и виноделие Молдавии. - 1973. - № 8.1. С. 18-20.

249. Носульчак В. А. Об изменчивости строения завязи винограда // Ботанический журнал. - 1969. - Т. 54. - № 3. - С. 460-463.

250. Носульчак В. А. Ранние и кишмишно-изюмные сорта винограда в условиях юго-западной Туркмении: Автореф. дисс. на соискание ученой степени канд. с.-х. наук: 06.01.08 - Л.: ВИР, 1969. - 33 с.

251. Никел Л. Дж. Регуляторы роста растений. - М.: Колос, 1984. - 190 с.

252. Перепелицина Е. П. Влияние некоторых ростовых веществ на урожай и качество бессемянных сортов винограда. Дисс. на соиск. уч. степени канд. биол. наук: 06.01.04. - Самарканд, 1967. - 175 с.

253. Плакида Е. К., Габович В. Н. Применение гиббереллина в виноградарстве. - Киев. - Урожай. - 1964. - 102 с.

254. Плотникова Н. В. О роли природных регуляторов роста в опадении органов у растений // Фитогормоны в процессах роста и развития растений. - М.: 1974, -С. 74-87.

255. Портянко В. Ф., Дулова М. К. Влияние йода, хлора, бора, гиббереллина и других стимуляторов на прорастание пыльцы и рост пыльцевыхтруббок винограда // Виноделие и виноградарство СССР. - 1969. - № 5. - С. 27-28.

256. Практикум по физиологии растений. - М.: Колос. - 1972. - 168 с.

258. Регуляторы роста и развития растений (Тезисы докладов I Всес. конференции). - М.: Наука. - 1981. - 302 с.

259. Радионова Н. А., Рункова Л. В. Действие гиббереллиновой кислоты на содержание естественных ауксинов и на некоторые физиологические процессы в растениях // Гиббереллины и их действие на растения. - М.: АН СССР. - 1963, -С. 134-138.

260. Ромашко И. С., Семенов А. К. Морфологическая и физиологическая характеристика различных типов цветков в соцветиях и особенности формирования ягод в гроздях винограда // Виноделие и виноградарство. - 1972, -№ 12, -С. 24-31.

261. Рубин Б. А. Курс физиологии растений. - М.: Высшая школа. - 1976. -576 с.

262. Савваф X. Влияние некоторых ростовых веществ на рост, развитие и плодоношение виноградарства. Автореф. дисс. на соиск. ученой степени канд. с.-х. наук: -М. - 1965. - 19 с.

263. Саркисова М. М. Влияние гиббереллина и ретарданта на дыхание у различных сортов винограда // Доклады АН арм. ССР. - 1986. - Т. 46. - № 3.1. С. 127-131.

264. Саркисова М. М. Значение регуляторов роста в процессах вегетативного размножения, роста и плодоношения виноградной лозы и плодовых пород. Автореф. дисс. на соиск. ученой степ. докт. биол. наук: - Ереван. - 1973, -45 с.

265. Саркисова М. М., Арутюнян Э. А., Оганесян Р. С. Влияние синтетических ростовых препаратов на активность дыхания и окислительно-восстановительные ферменты в побегах виноградной лозы в период глубокого покоя // МСХ Арм. СССР. - 1976. - № 3. - С. 62-68.

266. Саркисова М. М. Значение регуляторов роста в процессах роста и развития виноградной лозы и плодовых культур // Труды Арм. НИИ виноградарства, виноделия и плодоводства.,- 1977. - Т. 14. - С. 254. - 278.

267. Смирнов К. В., Перепелицина Е. П. Действие и последействие гиббереллина на виноградное растение // Химия в сельском хозяйстве. - 1970.12, -С. 53-55.

268. Смирнов К. В., Фузайлов К. Роль ростовых веществ в развитии ягод и семян винограда // Садоводство, виноградарство и виноделие Молдавии. - 1974,-№12, -С. 25-28.

269. Смирнов К. В., Перепелицина Е. П. Испытание физиолого активных веществ на винограде // Труды НИИ садоводства, виноградарства и виноделия им. Шредера. - 1976. - Вып. - 37. - С. 21-30.

270. Снегов Б. Новый стимулятор // Сельская жизнь. - 1969. - № 2. - С.23.24.

271. Стоев К. Д. Основные закономерности созревания и нарастания объема ягод // Вып. Физиология сельскохозяйственных растений. - М.: 1970.1. Т. 3, -С. 139-180.

272. Солдатова Р. Ю., Эпштейн В. Б. Фотосинтез и проводящая система у разнопродуктивных сортов винограда // Труды Самарк. Гос. ун-та. - 1978. - Вып. 372, -С. 58-63.

273. Тагиев С. Б. Влияние ростовых веществ на рост, развитие, урожайность и технологические особенности развития сортов винограда Азейбаржжана. Автореф. дисс. на соиск. ученой степени канд. с.-х. наук: - Баку, 1967. - 23 с.

274. Ташкенбаев А. X. Гиббереллин на винограде бессемянных сортов // Садоводство. - 1977. - № 6. - С. 34.

275. Ткаченко Г. В. Влияние гиббереллина на рост и плодоношение виноградной лозы // Гиббереллины и их действие на растения. - М.: АН СССР. - 1963. - С. 235-240.

276. Туркова Н. С., Строганова М. А. О действии гиббереллина на обмен веществ растений длинного дня // Регуляторы роста растений и нукклеиновый обмен. - М.: Науука. - 1965. - С. 57-64.

277. Хамди М. М., Имамалиев А. И., Нуритдинова Ф. Р. Влияние гиббереллиновой кислоты на эндогенные гиббереллиноподобные вещества ягод винограда // Узб. биол. журн. - 1977. - № 3. - С. 71-76.

278. Хрянин В. Н. Влияние гиббереллина на содержание алколоидов и хлорофилла в лекарственных растениях // Научн. докл. высш. школы биол. науки. - 1973. - № 1. - С. 78-80.

279. Хрянин В. П., Хрянина Т. М. Действиее хлорхолинхлорида и гиббереллина на рост и развитие растений // Рост растений и пути его регулирования. - М.: 1976.- С. 111-119.

280. Чайлахян М. X., ЛожниковаВ. П. Гиббереллиноподобные вещества в высших растениях и их влияние на рост и цветение // Физиология растений. - 1960. - Т. 7. - Вып. 5. - С. 521-530.

281. Чайлахян М. X., Саркисова М. М., Коганков В. Г. Влияние гиббереллина на плодоношение виноградной лозы в условиях Армении // Известия АН Арм. ССР. Биол. науки. - 1961. - Т. 14. - № 2. - С. 39-54.

282. Чайлахян М. X., Саркисова М. М. Влияние гиббереллина на рост ягод виноградной лозы // Докл. АН СССР. - 1963. - № 1. - С. 219-222.

283. Чайлахян М. X., Саркисова М. М. Динамика природных гиббереллинов у бессемянных и семенных сортов винограда в связи с влиянием гиббереллиновой кислоты // Докл. АН СССР. - Т. 165. - № 6. - 1965. - С. 1443-1446.

284. Чайлахян М. X., Саркисова М. М. Последействие гиббереллина на плодоношение виноградной лозы // Известия АН Арм. СССР Биол. науки. - 1965. -Т. 18, -№2, -С. 3-10.

285. Чайлахян М. X. Азарян X. Г. Влияние гиббереллина на рост растений длиннодневных видов в связи с фотопериодической индукцией // Докл. АН Арм. ССР. - 1969. - Т. 49. - № 2. - С. 102-107.

286. Чайлахян М. X., Хлопенкова Л. П. Передвижение гиббереллинов и гормональных веществ, влияющих на образование цветков в целых растениях // Физиололгия растений. - 1972. - Т. 19. - Вып. 5. - С. 1002-1010.

287. Чайлахян М. X., Хлопенкова Л. П., Хажакян X. К. О передвижении гиббереллинов и влияние их на рост побегов и утолщения стебля в целых растениях // Докл. АН СССР. Серия Биология. - 1974. - Т. 215. - № 2. - С. 484-487.

288. Чайлахян М. X. Гормональные регуляторы цветения растений // Физиол. раст. - 1976. - Т. 23. - Вып. 6. - С. 1160-1173.

289. Эманкулов У., Савченко А., Бродниковский М. Гиббереллин и урожай винограда // Сельск. хоз-во Таджикистана. - 1979. - № 11. - С. 5356.

290. Юзбашева А. К. Применение гиббереллина в виноградарстве // Сельск. хоз-во Таджикистана. - 1968. - № 7. - С. 38-40.

291. Якушкина Н. И., Чугунова Н. Г. Физиологическое действие света и вопрос о регулировании роста растений с помощью гиббереллина // Регуляторы роста и их действие на растения. - М.: 1967. - С. 111-123.

292. Якушкина Н. И., Чурикова В. В. Влияние внешних условий на образованиие ауксинов и гиббереллинов в растениях // Регуляторы роста и их действие на растения. - М.: 1967. - С. 137-147.

293. Якушкина Н. И., Пушкина Г. П. Физиологические особенности хлоропластов растений, обработанных гиббереллином и кинетином // Научн. доклады Высшей школы. Биол. науки. - 1972. - № 1. - С. 75-79.

294. Якушкина Н. И., Пушкина Г. П. Влияние гиббереллина и кинетина на содержание фитогормонов и их распределение в клетке // Рост растений и пути его регулирования. - М.: 1976. - С. 11-12.

295. Янин Г. И., Калинченко А. Н. Применение гиббереллина на винограде // Виноделие и виноградарство СССР. - 1983. - № 3. - С. 24-25.

296. Alleweldt G. Die wircung der ugubberellinsäure auf einjäriye Reben bei verschiedener Photoperiode. // Vitis. - 1959. - Bd. 2, H. 1. - S. 22-23.

297. Alleweldt G. Förderung des Jnfloreszenzwachstums der Reben durch ugibberellinsäure. // - 1959. - Bd. 2. - S. 71-78.

298. Alleweldt G. Die Beziehimgen zwichsen photoperiodischer Reaktion und ugibberellinsäure - Empfindlichkeit bei Reben. // Z. Pflanzenzucht. - 1960. - Bd. 43, H. I, - S. 63-84.

299. Alleweldt G. Weitere Unterchungen über die sortenspezifische ugibberellinreaktion der Reben. // Z. Pflanzenzucht. 1961. - Bd. 45, H. 2,- S. 178193.

300. Alleweldt G. Unterchungen über die Blutenbildung der Reben. // Vitis.-1964.-Bd. 4, H.2.- S. 176-183.

301. Alleweldt G. Jeter E. Unterchungen über die Beziehungen zwischen Blutenbidung und Triebwachstum bei Reben. // Vitis. 1969. - Bd. 8, H.4. - S. 286313.

302. Anticliff A.J. Field Trial with ugrowth Regulators on the Zante Currant (Vitis vinifera). // Vitis. 1967. -Bd. 6, H.l. - S. 14-20.

303. Agarvala S.C., Sharma C.P. Effect of auxin and gibberellic acid on some aspects of growth and metabolism of boron reficient sugar beet. // Ind. J. Plant Physiol. 1978. Vol. 21, 3. - P. 292-295.

304. Asakava Y., Tamari K., Jnoue K., Kaji J. Translocation and intercellular distribution of tritiated gibberellin. //Agr. Biol. Chem. 1974. - vol. 38, 4. - P. 713717.

305. Bertrand D.E., Weaver R.J. Effect of exogenous gibberellin on endogenous hormone content and development for "Black Corinth" grapes. // Vitis. 1972. - H.10. S. 292-297.

306. Bearder J.R., Sponsel V.M. Selected topics in gibberellin metabolism. // Biochem. Soc. Trans. 1977. - vol. 5. - P. 569-582.

307. Bernal Zugo J., Beachy R.N., Verner J.E. The response of barley aleurone layers to gibberellin acid includes the transcription of new seguences. // Biochem and Biophys. Res Communs. - 1981. - vol. 102, 2. - P. 617-623.

308. Bhalla P.R., Patel R.M. Effect of gibberellic acid on Thompson seedles grapes. // Phiysiol. Plant. 1971. - Vol. 24. - 1. - P. 106-109.

309. Bhalla P.Z. Gibberellin-like substances in developping Woterrmelon. // Phisiol. Plant. 1971,- vol. 24. - 1. - P. 106-109.

310. Brian R.W. Role of gibberellin like hormones in regulation of plant growth and flowering. // Nature. - 1958. - S. 1122 - 1123.

311. Brian R.W. An analysis of the effects of gibberellic asid on tomato leaf growth.// G. Exp. Bot. 1974. - V01. 25, 87. - P. 764-771.

312. Brown E., Moore I. N. Gibberellin and dirdling on seedless grapes.// Arkansas Farm Res. 1970. - Vol. 19, 2. - P.7.

313. Christodonlon A. , Weaver R.I. , Pool R.M. Response of Thompson seedless grapes to Prebloom Thinning. // Vitis. 1967. - Bd. 6, H. 3. - S. 303-308.

314. Clore W.I. Responses of Delaware grapes to gibberellin. // Proc. Amer. Soc. Hortic. Sci. Vol 87. - P. 259-263.

315. Considine J.A. , Coombe B. The Interaction of gibberellic acid and 2-chloroctyl trimethyl ammonium chlorid on fruit claster development in Vitis vinifera. // Vitis. 1972. Bd. 11,H. l.-S. 108-123.

316. Coombe G.B. Relationship of growth and development to changes in sugars, auxins and gibberellins in fruit in seeded and sedless varieties of Vitis Vinifera. // Plant Physiol. I960.- Vol. 35. - S. 241-250.

317. Coombe G.B. The effect of growth substances and liaf number on fruit set and size of Corinth and Sultana grapes. // J. Hort. Sci.- Vol. 40. P.307-316.

318. Coombe G.B. Hale C.R. The hormon content of ripeng grape berries and the effects of growth substants. // Plant Phisiol. 1973. - Vol. 51. - S. 629-634.

319. Dass H.C. , Randhava G.S. Differential respons of some seeded grape cultivar of Vitis Vinifera to application. // Vitis. 1967. - Bd. 6, H. 4. - S. 385-389.

320. Dass H.C., Randhava G.S. Effect of gibberellin on seeded Vitis Vinifera with special reference to indaction of seedlessness.// Vitis. 1968. - H.7. - S. 10-21.

321. Dass H.C. , Randhava G.S.Respons of Pusa Seedless grapes to 4-CPA, Kinetin and gebberellin acid. // Phisiol. Plant. 1968. - vol. 21. -P. 298-301.

322. Dass H.C. , Randhava G.S.Respons of certain seeded Vitis Vinifera verietes to gibberellin application at postbloom stade.// Am. Y. Enol. Viticult. 1968 -Vol.19.-P. 56-62.

323. Dass H.C., Randhava G.S. Effect of gibberellin on seeded Vitis Vinifera with special reference to indaction of seedlessness.// Vitis. 1968. - Bd. 7, H. l.-S. 10-21.

324. El-Zeftawi B.M.,West H.L. Effects of some growth regulators on the fresh and dry yeld of Zante currant (Vitis ViniferaVar.). // Vitis. 1970. - Bd. 9. H.l. - S. 47-51.

325. Farmahan H.L., Pandey R.M. Hormonal regulation of the lag phase in seeded and sedless grapes (Vitis Vinifera L.). // Vitis. 1976. - Bd. 15, H. 4. - S. 227-235.

326. Handel L.G. Effect of gebberellic acid on seeded wine grapes. // Wines and Vines. 1965. - Vol.46, N. 4. - P.62.

327. Janes Rassell Z., Philliphs J.D. Organs of gibberellin synthesis in lightgrown sunflower plants. // Plant Physiol. 1966. - Vol. 41, N.8. - P. 1381-1386.

328. Isoda R., ABA, JAA und GA levels in dormant buds of grape vines // Bull. Hiroshima Agric. Coll. 1975. - Vol.5. - P.125-131.

329. Inaba A., Ischiodo M., Sobijima R. Changes in endogenous hormon concentrations during berry development in relation to the ripening of Delavare grapes. // J.Japan. Soc. Hort. Sci. 1976. - Vol.45. - P. 245-252.

330. Ito H., Motomura Y., Konno Y., Hatyama T. Egsogenous gibberellin as responsible for the seedless on the development of seedless Delaware grapes. // Tohoku J., Agricult. Res. 1969. - Vol. 20, N.l. - P. 1-18.

331. Iwahori S., Weaver R., Pool R.M. Gibberellin-like activity in Berries of seeded and seedless Tokay grapes. // Plant Physiol. 1968. - Vol.43, N.3. - P.333-337.

332. Kang Y., Weaver R., Pool R.M. Effects of low temperature andbgrowth regulators on germination of seeds of Tokay grapes. //Proc. Amer. Soc. Hort. Sci. -1968,- Vol.92. -P.323-330.

333. Kasimatis A.N., Weaver R.J., Pool R.M., Halsey D.D. Respons of "Perlette" grape berries to gibberellic acid applied during bloom or at fruit set. // Amer.J. Enol. Viticult. 1971. - Vol.22. - P.19-23.

334. Lavel S. Effect of gibberellic acid on seeded grapes.// Nature. 1960,-Vol.185, N.4710. - P.395.

335. Lavin A.A., Valenzuela B.J. Effect of gibberellic acid on yield and berry characters of grape (Vitis Vinifera L.) Cultivar Moscatel Rosada. // Agricult. Tec.(Chili). 1975,- Vol.35. - P.85-89.

336. Lilov D., Christov Ch. Content of free gibberellins in the inflorescences and cluster of vines of different flower and fruit formation. // C.R.Acad. Bulg. Sci. -1977. Vol.30. -P.747-750.

337. Looney N.E. Some growth regulator effect on berry set, yield and quality of Himrod and de Chaunac grapes. // Can. J. Plant Sci. 1975.- Vol.55, N. 1. - P. 117120.

338. Looney N.E., Wood D.E. Some Claster thinning and gibberellic acid effects on fruit set, berry size, vine growthe and yild of de Chaunac grapes. // Can. J. Plant Sci. (Ottawa). !977.-Vol.57. -P.653-659.

339. Manivel L., Weaver R.J. Effect of growth regulators and heat on germination of Tokay grape seed. // Vitis.-1974.-Vol. 12.-P.286-290.

340. Mitchel E. Corelation of the force required to pick rotundifolia berries and their solube solids content. // Am. Enol. Vitis.-1979.-Vol. 19, N.l-P.135-138.

341. Nakagawa S., Nanjo Y. A morphological stady of Delaware grape Berries. // J.Jap. Soc. Hort. Sci. -Vol.34. -P.85-95.

342. Nakamura M., Takahashi E., Noda T. Rachis lignification and seedless Berry prodaction in seeded grape cultivar "Kuoho" as influenced by gibberellin and quercetin.// Techn. Bull. Fac.Hortic. Chiba. Univ. -1974. -N.22 -P.7-12.

343. Rappaport L. Gibberellic Acid: Some effect on Plant Growth, plant develepment and dormancy.// Western grower and shipper.-1957. Vol.28, N.ll.-P.80-84.

344. Randhava G.S., JierC.P. and Nath N. Causes and seedlessness in the Pusa seeless veriety of grapes (Vitis Vinifera L.). // Indian J. Hortic. -1962.-Vol.19, N.3 -P.155-139.

345. Reid D.M. and Crozier A. The effect of the export of gibberellins from the root to the shoot.//Planta.-1969.-Vol.43, N.4.-S.376-379.

346. Sacks R.M. and Weaver R.J. Gibberellin and aixin induced berry enlargement in Vitis Vinifera L. // J. Hortic. Sci. -1968,-Vol. 34, N.2.-P. 185-195.

347. Shindy W.W., WeaverR.J. Plant regulators after translocation of photosyntheticprodacts. //Nature. 1967. Vol.214.-P. 1024-1025.

348. ShindyW.W., Weaver R.J. Export of photosynthate affected when leaves are protreated with growth substances.// Nature.- 1970. -Vol.227.-P.301-302.

349. Skene K.G. Gibberellin like substances in root exudate of vitis vinifera.// Planta.-1967. -Vol.74 .-P.250-262.

350. Skirin R.M., Hull J.W. Gibberellic acid, seed namber and rate of maturation as related to univenripening "Concord" grapes.// Hort. Sci. -1972. -Vol.7. -P.391-392.

351. SugiuraA., InabaA. Staties on the mechanism of gibberellin induced seedlessness of Delaware grapes. I. Effect of pre-bloom gibberellin treatment on pollen germination. // J.Japan. Soc. Hort. Sci. -1966. -Vol.35. -P.233-241.

352. Takagi T., Furikawa Y., Tomana T. Stadies on the stabilisation of GA -induced seedless berry prodaction in Muscat Bailey A Grapes. II. Formation of Anormal by GA Application. // J. Japan. Soc. Hort. Sci. -1979.- Vol.48, N.2. -P.131-136.

353. WeaverR.J., McCuune S.P. Effect of gebberellin on seedless Vitis Vinifera. // Hilgardiu. -1959. Vol.2., N.6. -P.247-279.

354. Weaver R.J. Toxicity of gibberellin to seedless and seeded varieties of Vitis Vinifera.// Nature. 1980. -Vol.188, N.1443. -P.l 135-1136.

355. Weaver R.J., Alleveldt G., Pool R.M. Absorption and translocation of gibberellic acid in thi grapvine.// Vitis.- 1966. Bd.5, H.6.-S.446-454.

356. WeaverR.J., Pool R.M. Gibberellin-like activity in seeded fruit of vitis vinifera L. // Naturwissenschaften. 1965a. - Vol.52. - S. 111-112.

357. Weaver R.J., Pool R.M. Relation of seededness and ringing to gibberellin like activity in berries of vitis vinifera. // Plant Physiol. - 1965b. - vol.40. S.770-776.

358. Weaver R.J., Pool R.M. Berry response of "Thompson seedless" and "Perlete" grapes to application of gibberellic acid. // J.Amer. Soc. Hort. Sci. 1971a.- Vol.96.-S.162-166.

359. Weaver R.J., Pool R.M. Thinning "Tokay" and "Zinfandel" grapes by bloom sprays of gibberellin. // J.Amer.Soc.Hort.Sci. 1971b. - Vol.96.- S.820-822.

360. Weaver R.J., Shindy W., Klieewer W.M. Growth regulator induced movement of photosynthetic prodacts into fruits of "Black Corinth" grapes. // Plant Physiol. 1969. - Vol.44. - P.183-188.

361. WeaverR.J. Effect of time of application of potassium gibberellate on claster development of "Zinfandel" grapes. // Vitis.- 1975. Bd.14, H.2. - S.97-102.

362. Wood D.E., Looney N.E. Some claster thinning end gibberellic acid effects on juce and wine quality of de Chaonac grapes. // Can. J. Plant. Sci. (Ottawa).- 1977. -Vol.57. S.643-646.

363. Zuluaga P.A., Zuluaga E.M., Iglesia F.I. Indaction of stimulative Parthenocarpy im Vitis Vinifera L. // Vitis.- 1968,- Bd.7.,H.2. S.97-I04.

364. Zuluaga E.M., Zumelli J., Christensen F.I. Indaction of growth regulators on the characteristic of berries of Vitis Vinifera L. // Phiton. 1968. - Vol.25. - S.35-48.

Обратите внимание, представленные выше научные тексты размещены для ознакомления и получены посредством распознавания оригинальных текстов диссертаций (OCR). В связи с чем, в них могут содержаться ошибки, связанные с несовершенством алгоритмов распознавания. В PDF файлах диссертаций и авторефератов, которые мы доставляем, подобных ошибок нет.

За последние 20 лет накоплены сведения о плейотропных, неэритропоэтических функциях эритропоэтина (ЭПО), система ЭПО - рецептор ЭПО на ауто- и паракринном уровнях рассматривается как звено неспецифической защиты при повреждении, а рецепторы ЭПО на неэритроидных клетках, в частности на различных популяциях лейкоцитов, в том числе фагоцитах, обозначаются как защищающие ткань рецепторы. Цель работы – исследовать влияние различных концентраций ЭПО на функциональную активность фагоцитов в экспериментальных условиях in vitro – реализована на цельной крови 20 клинически здоровых людей. Рекомбинантный человеческий ЭПО в составе препарата «Эпокрин» (международное непатентованное название: эпоэтин альфа, ФГУП ГНИИ ОЧБ ФМБА России, г. Санкт-Петербург) применяли в концентрациях 1,88 МЕ/л; 3,75 МЕ/л; 7,5 МЕ/л; 15 МЕ/л; 30 МЕ/л, что соответствует от 12,5, 25, 50, 100, 200% от среднего физиологического уровня ЭПО в крови, показатели исследовали после 10 и 30 мин инкубации в термостате при 37 °С. Функцию фагоцитов исследовали по способности поглощать частицы монодисперсного, полистирольного латекса и кислород-зависимому внутриклеточному метаболизму в спонтанном и индуцированном тесте с нитросиним тетразолием (НСТ-тесте). Установлено, что 10-минутный контакт ЭПО с цельной кровью не оказывает статистически значимого влияния на функцию фагоцитов, после 30-минутной инкубации ЭПО с цельной кровью зафиксирована активация поглотительной способности и кислородзависимого метаболизма фагоцитов периферической крови. Выявлено, что ЭПО в диапазоне доз от 1,88 до 30 МЕ/л увеличивает количество активно фагоцитирующих клеток и поглотительную способность отдельного фагоцита; в дозах 3,75 и 15 МЕ/л ЭПО повышает количество клеток, генерирующих активные метаболиты кислорода, и интенсивность генерации активных метаболитов кислорода отдельным фагоцитом в индуцированном НСТ-тесте. Эффект ЭПО на функциональную активность фагоцитов не зависит от дозы.

фагоцитоз

врожденный иммунитет

эритропоэтин

1. Осиков М.В. Анализ эфферентных свойств церулоплазмина и альфа-1-кислого гликопротеина при экспериментальном перитоните / М.В. Осиков, Л.В. Кривохижина, А.В. Мальцев // Эфферентная терапия. – 2006. – Т. 12, № 4. – С. 36-39.

2. Осиков М.В. Влияние гемодиализа на процессы свободнорадикального окисления у больных хронической почечной недостаточностью / М.В. Осиков, В.Ю. Ахматов, Л.В. Кривохижина // Вестник Южно-Уральского государственного университета. Серия: Образование, здравоохранение, физическая культура. – 2007. – № 16 (71). – С. 95-97.

3. Осиков М.В. Гемостазиологические эффекты альфа-1-кислого гликопротеина при экспериментальном септическом перитоните / М.В. Осиков, Е.В. Макаров, Л.В. Кривохижина // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. – 2007. – Т. 144, № 8. – С. 143-145.

4. Осиков М.В. Влияние альфа-1-кислого гликопротеина на процессы свободнорадикального окисления при экспериментальной печеночной недостаточности // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. – 2007. – Т. 144, № 7. – С. 29-31.

5. Осиков М.В. Роль эритропоэтина в коррекции нарушений сосудисто-тромбоцитарного гемостаза у больных с терминальной стадией хронической почечной недостаточности / М.В. Осиков, Т.А. Григорьев // Фундаментальные исследования. – 2011. – № 9-3. – С. 462-466.

6. Осиков М.В. Эфферентные и антиоксидантные свойства эритропоэтина при хронической почечной недостаточности / М.В. Осиков, Т.А. Григорьев, Ю.И. Агеев // Эфферентная терапия. – 2011. – Т. 17, № 4. – С. 7-13.

7. Осиков М.В. Влияние эритропоэтина на функциональную активность тромбоцитов / М.В. Осиков, Т.А. Григорьев, А.А. Федосов, Д.А. Козочкин, М.А. Ильиных // Современные проблемы науки и образования. – 2012. – № 6. - URL: www..02.2014).

8. Осиков М.В. Современные представления о гемостазиологических эффектах эритропоэтина / М.В. Осиков, Т.А. Григорьев, А.А. Федосов // Фундаментальные исследования. – 2013. – № 5-1. – С. 196-200.

9. Осиков М.В. Эритропоэтин как регулятор экспрессии тромбоцитарных гликопротеинов / М.В. Осиков, Т.А. Григорьев, А.А. Федосов, Д.А. Козочкин, М.А. Ильиных // Современные проблемы науки и образования. – 2013. – № 1. - URL: www..02.2014).

10. Broxmeyer H.E. Erythropoietin: multiple targets, actions, and modifying influences for biological and clinical consideration // J. Exp. Med. – 2013. – Vol. 210 (2). – P. 205-208.

Клеточные механизмы врожденного иммунитета связаны с реализацией функциональной активности фагоцитирующих клеток, прежде всего нейтрофилов и моноцитов/макрофагов. Изменение функции фагоцитов может являться ключевым звеном патогенеза при различных заболеваниях и типовых изменениях гомеостаза . Так, при хронической почечной недостаточности активация врожденного звена иммунитета и связанная с ней манифестация локального и системного воспаления способствует развитию и прогрессированию сердечно-сосудистых заболеваний; при термической травме изменения функции фагоцитов сопряжены с динамикой и успешным завершением репаративных процессов. Одной из ключевых задач современной медицинской науки является поиск регуляторов функциональной активности эффекторов врожденного иммунитета. Ранее нами продемонстрирована роль биологически активных веществ эндогенной природы церулоплазмина и альфа-1-кислого гликопротеина в регуляции функции фагоцитов при различной патологии . В последние годы внимание многих исследователей привлекают плейотропные эффекты эритропоэтина (ЭПО). Впервые ЭПО стал известен как гемопоэтин - фактор, стимулирующий образование эритроцитов de novo, благодаря пионерской работе Carnot and Deflandre, опубликованной в 1906 г. Основным местом синтеза ЭПО являются перитубулярные и тубулярные клетки почек, в которых в ответ на снижение парциального давления кислорода экспрессируется ген ЭПО при участии гипоксия-индуцируемого фактора-1 (HIF-1). Современные представления о механизмах действия ЭПО на молекулярном уровне позволяют отнести его одновременно к гормонам, факторам роста и цитокинам. Основной точкой приложения для действия ЭПО являются клетки эритроидного ряда в костном мозге: бурст- и колониеобразующие единицы гранулоцитарно-моноцитарно-мегакариоцитарно-эритроцитарные, эритроцитарные, а также эритробласты и пронормобласты, на которых имеются специфические рецепторы. ЭПО отвечает за пролиферацию, дифференцировку и угнетение апоптоза в этих клетках. Открытие рецепторов для ЭПО на клетках неэритроидных тканей, таких как нейроны, кардиомиоциты, клетки почек, эндотелиоциты позволило обнаружить новые биологические эффекты ЭПО. Ранее нами показана протективная роль ЭПО при хронической почечной недостаточности в клинических и экспериментальных условиях в отношении аффективного статуса, психофизиологического статуса, функционального состояния системы гемостаза и др. . Полагаем, что косвенная реализация плейотропных эффектов ЭПО может быть связана с его влиянием на функцию фагоцитирующих клеток. В настоящее время система ЭПО-рецептор ЭПО на ауто- и паракринном уровне рассматривается как звено неспецифической защиты при повреждении, а рецепторы ЭПО на неэритроидных клетках обозначаются как защищающие ткань рецепторы. Цель работы - исследовать влияние различных концентраций ЭПО на функциональную активность фагоцитов в экспериментальных условиях in vitro.

Материалы и методы исследования

Работа выполнена с использованием цельной крови 20 клинически здоровых людей-доноров. Рекомбинантный человеческий эритропоэтин в составе препарата «Эпокрин» (международное непатентованное название: эпоэтин альфа, ФГУП ГНИИ ОЧБ ФМБА России, г. Санкт-Петербург) применяли в концентрациях 1,88; 3,75; 7,5; 15; 30 МЕ/л, что соответствует от 12,5, 25, 50, 100, 200% от среднего физиологического уровня ЭПО в крови, показатели исследовали после 10 мин и 30 мин инкубации в термостате при 37 °С. Функцию фагоцитов исследовали по фагоцитарной способности и кислородзависимому внутриклеточному метаболизму. Фагоцитарную способность лейкоцитов оценивали по поглощению частиц монодисперсного (диаметр 1,7 мкм), полистирольного латекса, для чего 200 мкл суспензии клеток смешивали с 20 мкл взвеси частиц полистирольного латекса. После 30 мин инкубации при температуре 37 °С оценивали активность и интенсивность фагоцитоза, фагоцитарное число. Оценку внутриклеточного кислородзависимого метаболизма в фагоцитах проводили с помощью НСТ-теста, который основан на образовании нерастворимого диформазана из нитросинего тетразолия. Проводили спонтанный и индуцированный НСТ-тест. Для постановки спонтанного НСТ-теста к 100 мкл крови добавляли 50 мкл физиологического раствора и 20 мкл нитросинего тетразолия, в индуцированном НСТ-тесте к 100 мкл крови 50 мкл суспензии полистирольного латекса в физиологическом растворе и 20 мкл нитросинего тертразолия. Учитывали количество диформазан-положительных клеток (активность НСТ-теста), для вычисления индекса НСТ-теста оценивали площадь гранул по отношению к площади ядра (единичные пылевидные гранулы - 0; клетки с отложениями, не превышающие в сумме 1/3 площади ядра, - 1; клетки с отложением диформазана более 1/3 площади ядра - 2; превышающие размеры ядра - 3). Статистический анализ проведен с использованием пакета прикладных программ Statistica for Windows 8.0. Проверку статистических гипотез проводили с использованием рангового дисперсионного анализа по Фридмену, критерия Вилкоксона. Для оценки зависимости влияния ЭПО на функцию фагоцитов от дозы использован корреляционный анализ с вычислением коэффициента корреляции Спирмена. Отличия считали статистически значимыми при р<0,05.

Результаты исследования и их обсуждение

Результаты влияния ЭПО на показатели функциональной активности фагоцитов после 10 мин инкубации при 37 °С представлены в табл. 1 и 2. Как видно, нами не зафиксированы статистически значимые изменения поглотительной способности и кислородзависимого метаболизма фагоцитов периферической крови. Следует отметить, что на правах тенденции увеличивалась активность, интенсивность фагоцитоза, фагоцитарное число, показатели спонтанного и индуцированного НСТ-теста; наибольшие значения средних величин наблюдались при добавлении ЭПО в дозе 30 МЕ/л (200% от физиологического уровня в сыворотке). Установлено, что 30-минутная инкубация ЭПО с цельной кровью приводит к изменению функциональной активности фагоцитов периферической крови (табл. 3 и 4). ЭПО в диапазоне концентраций от 1,88 до 30,00 МЕ/л приводит к активации поглотительной способности фагоцитов: увеличивается активность, интенсивность фагоцитоза и фагоцитарное число. Максимальное увеличение количества активно фагоцитирующих клеток, на 49,9% от среднего значения в контрольной группе, отмечено при добавлении ЭПО в дозе 7,5 МЕ/л (50% от физиологического уровня ЭПО в сыворотке). Эффект ЭПО не зависит от дозы при оценке активности фагоцитоза (коэффициент корреляции Спирмена R=0,21; p>0,05), интенсивности фагоцитоза (коэффициент корреляции Спирмена R=0,17; p>0,05), фагоцитарного числа (коэффициент корреляции Спирмена R=0,13; p>0,05). Влияние ЭПО на кислородзависимый метаболизм в фагоцитах носит неоднозначный характер. Так, эффект ЭПО во всех используемых дозах на показатели спонтанного НСТ-теста отсутствовал (табл. 4). Отмечено, что ЭПО повышает генерацию метаболитов кислорода фагоцитами после индукции частицами латекса только в дозах 3,75 и 15,00 МЕ/л (25 и 100% от физиологического уровня ЭПО в сыворотке); возрастает как количество активных клеток, так и индекс НСТ-теста, отражающий интенсивность генерации кислородных метаболитов отдельной клеткой.

По данным других исследователей, на лейкоцитах обнаружены рецепторы к ЭПО, так, с использованием методов проточной цитометрии и обратной полимеразной цепной реакции были обнаружены экспрессия гена и мРНК рецептора ЭПО в Т- и В-лимфоцитах и моноцитах. Группа исследователей из центра трансплантологии в Бергамо (Италия) полагают, что одной из мишеней для иммуномодулирующего действия ЭПО являются дендритные клетки, экспрессирующие рецепторы к ЭПО, взаимодействие с которыми ЭПО приводит к экспрессии CD86, CD40, TLR-4. При этом данные о влиянии ЭПО на функциональную активность фагоцитов противоречивы. Так, Kristal B. et al. (2008) приводят данные о том, что ЭПО у больных хронической почечной недостаточностью при исходном увеличении вызывает снижение продукции супероксид-анион-радикала нейтрофилами in vivo и ex vivo и увеличивает стабильность (срок жизни) нейтрофилов in vitro. Spaan M. et al. (2013) констатируют активацию поглотительной и снижение киллинговой способности фагоцитов у больных вирусным гепатитом С после культивирования в среде с добавлением ЭПО. Полагаем, что такие противоречивые данные связаны с регулирующим влиянием ЭПО на функциональную активность фагоцитов, эффект ЭПО определяется исходным уровнем функциональной активности клеток. Известно, что внутриклеточная трансдукция сигнала после связывания ЭПО с рецептором обеспечивается многочисленными Jak-2-зависимыми сигнальными путями: трансдукторы сигналов и активаторы транскрипции (STAT-5, STAT-3), фосфатидилинозитол-3-киназа (PI3K), протеинкиназа В (РКВ), гликоген-синтаза киназа-3β (GSK-3β), митоген-активируемая протеинкиназа (MAPK) и др . Возможно, такое многообразие сигнальных путей объясняет неоднозначный, модулирующий характер влияния ЭПО на функциональную активность клеточных эффекторов врожденного иммунитета.

Таким образом, результаты проведенного исследования позволили установить, что 10-минутный контакт ЭПО с цельной кровью не оказывает статистически значимого влияния на функцию фагоцитов. В экспериментальных условиях in vitro после 30-минутной инкубации ЭПО с цельной кровью зафиксирована активация поглотительной способности и кислородзависимого метаболизма фагоцитов периферической крови. Выявлено, что ЭПО в диапазоне доз от 1,88 до 30 МЕ/л увеличивает количество активно фагоцитирующих клеток и поглотительную способность отдельного фагоцита; в дозах 3,75 и 15 МЕ/л ЭПО повышает количество клеток, генерирующих активные метаболиты кислорода, и интенсивность генерации активных метаболитов кислорода отдельным фагоцитом в индуцированном НСТ-тесте. Эффект ЭПО на функциональную активность фагоцитов не зависит от дозы.

Таблица 1. Влияние ЭПО на показатели поглотительной способности фагоцитов периферической крови после 10 мин инкубации (M±m)

Условия эксперимента	Активность фагоцитоза, %	Фагоцитарное число, у.е.
Контроль (+ физ. р-р) (n=10)
ЭПО 1,88 МЕ/л (n=10)
ЭПО 3,75 МЕ/л (n=10)
ЭПО 7,5 МЕ/л (n=10)
ЭПО 15 МЕ/л (n=10)
ЭПО 30 МЕ/л (n=10)

Таблица 2. Влияние ЭПО на показатели кислородзависимого метаболизма фагоцитов периферической крови после 10 мин инкубации (M±m)

Условия эксперимента	Спонтанный НСТ-тест	Индуцированный НСТ-тест
Условия эксперимента	Активность,	Активность,
Контроль (+ физ. р-р) (n=10)
ЭПО 1,88 МЕ/л (n=10)
ЭПО 3,75 МЕ/л (n=10)
ЭПО 7,5 МЕ/л (n=10)
ЭПО 15 МЕ/л (n=10)
ЭПО 30 МЕ/л (n=10)

Таблица 3. Влияние ЭПО на показатели поглотительной способности фагоцитов периферической крови после 10 мин инкубации (M±m)

Условия эксперимента	Активность фагоцитоза, %	Интенсивность фагоцитоза, у.е.	Фагоцитарное число, у.е.
Контроль (+ физ. р-р) (n=10)
ЭПО 1,88 МЕ/л (n=10)
ЭПО 3,75 МЕ/л (n=10)
ЭПО 7,5 МЕ/л (n=10)
ЭПО 15 МЕ/л (n=10)
ЭПО 30 МЕ/л (n=10)

* - статистически значимые (p<0,05) различия с группой контроля.

Таблица 4. Влияние ЭПО на показатели кислородзависимого метаболизма фагоцитов периферической крови после 10 мин инкубации (M±m)

Условия эксперимента	Спонтанный НСТ-тест	Индуцированный НСТ-тест
Условия эксперимента	Активность,	Активность,
Контроль (+ физ. р-р) (n=10)
ЭПО 1,88 МЕ/л (n=10)
ЭПО 3,75 МЕ/л (n=10)
ЭПО 7,5 МЕ/л (n=10)
ЭПО 15 МЕ/л (n=10)
ЭПО 30 МЕ/л (n=10)

* - статистически значимые (p<0,05) различия с группой контроля.

Рецензенты:

Куренков Е.Л., д.м.н., профессор, заведующий кафедрой анатомии человека ГБОУ ВПО «Южно-Уральский государственный медицинский университет» Минздрава России, г.Челябинск.

Цейликман В.Э., д.б.н., профессор, заведующий кафедрой биологической химии ГБОУ ВПО «Южно-Уральский государственный медицинский университет» Минздрава России, г.Челябинск.

Библиографическая ссылка

Осиков М.В., Телешева Л.Ф., Ожиганов К.С., Федосов А.А. ВЛИЯНИЕ ЭРИТРОПОЭТИНА НА ПОКАЗАТЕЛИ ВРОЖДЕННОГО ИММУНИТЕТА В ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ УСЛОВИЯХ IN VITRO // Современные проблемы науки и образования. – 2014. – № 1.;
URL: http://science-education.ru/ru/article/view?id=12138 (дата обращения: 01.02.2020). Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»

УКОРЕНЕНИЕ – КЛЮЧЕВОЙ ЭТАП РАЗМНОЖЕНИЯ РАСТЕНИЙ IN VITRO

В.И. ДЕМЕНКО, К.А. ШЕСТИБРАТОВ, В.Г. ЛЕБЕДЕВ

(Кафедра плодоводства)

журнал Известия ТСХА, выпуск 1, 2010 год

В статье представлены результаты многолетних исследований о влиянии различных регуляторов роста, углеводов, длительности пассирования, качества агара, структуры среды, солевого состава питательной среды на корнеобразование. Обсуждаются этапы ризогенеза и их продолжительность. Особое внимание уделепо проблеме этиоляции, физическим факторам, гормональном и солевому состав питательной среды. Содержатся важные и достоверные сведения о влиянии света, состава среды на ризогенез, жизнедеятельность растений и нестерильных условиях.

Ключевые слова: in vitro , регуляторы роста, питательная среда, ювениль-ность, этиоляция, углеводы, земляника, яблоня, груша, сирень, роза, актинидия китайская, ясень обыкновенный.

Процесс корнеобразования - это серия различных биохимических, физиологических и гистологических событий. Близость к сосудистым тканям предрасполагает клетки закладывать корневые примордии . Место заложения корней влияет на жизнеспособность укорененных растений, особенно полученных in vitro. Можно получить 100% укоренение in vitro и 100% гибель растений в нестерильных условиях . При любых способах укоренения процесс адвентивного корнеобразования проходит 3-4 этапа: индукция, инициация, появление корней за пределами стеблевой части черенка . Продолжительность первых двух этапов 10-15 дней, за этот период предкомпетентные клетки приобретают способность регенерировать меристематические очаги, в них начинается синез корнеспецифических белков . Появление корней зависит от генома растений и условий укоренения.

Одна из особенностей размножения растений in vitro - ювенилизация тканей, что является причиной легкости ризогенеза in vitro . Степень ее проявления зависит от условий культивирования, и в первую очередь от содержания в сосудах этилена .

Предпосылкой для начала корнеобразования при любых способах размножения является этиоляция. Причина влияния этого феномена связана с анатомическими и биохимическими изменениями, а также с ювениализацией тканей. У этиолированных черенков выделены белки-рецепторы, обладающие высоким сродством с ауксином. В темноте большая часть ауксина связана с белками . Этиоляция повышает активность пероксидазы, ИУК - оксидазы в тканях, что ускоряет начало образования корней. Она усиливает чувствительность тканей к экзогенному ауксину, давая возможность использовать меньшие концентрации. Характер действия этиоляции in vitro зависит от вида растений и имеет пролонгирующий эффект . Укоренение in vitro происходит при освещении всего черенка, что сказывается на ризогенезе и частично может нивелироваться ИМК, которая в меньшей степени стимулирует синтез этилена по сравнению с ИУК . Основная проблема успешного ризогенеза in vitro заключается в трудности разделения момента заложения первого корневого примордия с началом синтеза этилена. При этом очень высокий или очень низкий уровень этилена отрицательно влияет на укоренение . Свет выполняет важную роль в регулировании морфогенетических процессов. Облучение уже образовавшихся корней светом подавляет удлинение корней на 40-50%, за счет 4-кратного увеличения содержания этилена . Для трудно укореняемых видов рекомендуют использовать темновой период на начальном этапе укоренения. Его продолжительность зависит от культуры и колеблется от 3~5 дней до 4 недель. Ряд авторов отмечают сложную зависимость укоренения от светового режима, регуляторов роста, рН среды . Положительное действие этиоляции на этапе пролиферации побегов зависит от сорта. Применение ауксинов и темноты на последней неделе пролиферации побегов М27 уменьшало укореняемость на 65% .

Действие ферментативных систем, которые катализируют разрушение ИУК, осуществляется только в присутствии кислорода. Питательные среды, применяемые для укоренения побегов in vitro, содержат очень мало кислорода, что не способствует развитию корневых волосков.

Поэтому подходы к укоренению in vitro должны отличаться от укоренения in vivo. Современное промышленное размножение растений in vitro невозможно без использования регуляторов роста. Как правило, для укоренения используют аналоги ИУК. Отношение к экзогенному ауксину, времени и способу его применения in vitro неоднозначно. Достаточное количество заложившихся корней и хорошая приживаемость растений в нестерильных условиях получены при экспозиции 7 дней на среде с ауксином. Более длительное воздействие приводит к образованию каллуса . Побеги легкоукореняемых культур можно укоренять на средах без ауксинов. Однако ауксины часто не являются лимитирующим фактором и для трудно укореняемых видов.

Кроме веществ из группы ауксинов отмечают стимулирующее влияние ретардантов на укоренение и характер развития корней . Некоторые из них активируют транспорт ИУК, углеводов к базальной части черенка. Методика укоренения in vitro позволяет контролировать физические факторы, гормональный и солевой состав питательной среды. В то же время освещение основания побега, длительное воздействие ауксином, разнокачественность побегов, незначительный замкнутый объем, отсутствие или недостаточно интенсивный газовый обмен, его специфичность, недостаточное содержание кислорода в зоне укоренения, возможная латентная стекловидность побегов, отсутствие транспирации, фотосинтеза и воздействия ультрафиолетовой радиации создают проблемы для укоренения и последующей приживаемости растений в нестерильных условиях. Оптимизация этих факторов и их взаимодействия являются основной задачей исследований ризогенеза in vitro. В подавляющем большинстве опытов по укоренению in vitro исследователи отмечают важность осмотического потенциала среды, который зависит от концентрации сахарозы, солевого состава, особенно азота и калия . Как правило, минеральный состав среды М.С. уменьшают в 2-8 раз или заменяют на среду Уайта . При этом ведущая роль отводится содержанию нитратного и аммиачного азота . Отсутствие той или иной формы азота отрицательно влияет на укоренение побегов .

Пригодные для укоренения побеги плодовых культур формируются только после длительного культивирования. Даже на 11-14-м пассаже укоренение трудноукореняемых видов растений представляет серьезную проблему . Однако очень длительное пассирование нежелательно, особенно для видов, вегетативное потомство которых предназначено для многолетних насаждений.

Считается перспективным укоренение побегов, полученных in vitro, в стерильных субстратах при повышенной влажности либо в атмосфере искусственного тумана . По способности к укоренению in vitro в научной литературе представлен широкий диапазон данных - от легко укореняемых видов (земляника) до отсутствия укоренения (груша каллариана) . Поэтому неудивительно, что многие авторы считают успешное укоренение побегов in vitro ключевым этапом микроклонального размножения .

Материалы и методика

Способность к укоренению in vitro земляники, яблони, груши, сирени, роз, актинидии китайской, ясеня обыкновенного изучали: с использованием различных регуляторов роста (ИУК, ИМК, НУК, культар, мивал. крезацин, гумат натрия, азотнокислое серебро); углеводов (сахароза, глюкоза, мальтоза, фруктоза, сорбит, маннит); ПАВ (твин-40, КЭП); влияния длительности пассирования и качества побегов, агара и его заменителей, структуры среды и воздействия физических факторов, солевого состава питательной среды. Растения выращивали по общепринятым методикам с учетом специфики этапа укоренения. Учитывали начало корнеобразования, развитие каллуса, количество корней, рост побега. В каждом варианте по 10-14 растений в четырех повторностях.

Результаты и их обсуждение

Способность боковых побегов к укоренению in vitro во многом определяет эффективность технологии микроклонального размножения. Это наиболее затратная статья (75% затрат ручного труда) в стоимости конечной продукции. Успешное прохождение этапа ризогенеза зависело от культуры, сорта, условий этапа пролиферации, солевого и гормонального состава среды, количества пассажей. Только побеги земляники были способны к укоренению на первом пассаже, а робинии и вейгелы на втором пассаже. Укоренение земляники зависело от солевого состава среды и ее формы. Среда Фоссарда лучше подходит для укоренения земляники. Корневая система на этой среде отличалась сильным ростом, была окрашена и имела боковые корни. Растения на среде Фоссорда были развиты сильнее, имели 4-5 листьев темно-зеленого цвета. Развитие каллуса отсутствовало. Менее концентрированные среды уменьшали укореняемость и угнетали развитие корневой системы.

Среда М.С. стимулировала укоренение и развитие каллуса у основания побега, а наличие каллуса нежелательно, так как при пересадке растений в нестерильные условия они погибают от ботритиса. фузариоза и питиума. Сокращение в среде М.С. макроэлементов или азота на 1/2 или 4/5 увеличивало укоренение практически всех изучаемых культур, а корнеобразование происходило при более низких концентрациях ауксина. На полной среде М.С., содержащей 0,5 мг/л ИМК, развивались толстые, короткие корни. На бедных средах корни были нитевидные и развивались из основания побега.

Характер развития корневой системы зависел от типа регулятора роста, индуцирующего корнеобразо-вания. Стимулирующее влияние ИМК и ИУК в опытах с земляникой в большей мере проявилось на твердых средах, а НУ К - на жидкой. Более мощная корневая система образовалась на жидкой среде, содержащей НУК. Однако развитие надземной системы не происходило, что связано со способностью НУК поглощаться и перемещаться по растительным тканям. На всех средах отмечено интенсивное развитие каллуса, особенно на средах с НУК. С учетом недостатков ауксина на этапе укоренения in vitro необходим поиск других веществ, которые стимулировали бы быстрое развитие корневой и засухоустойчивость надземной систем. Из литературных источников известно, что такими свойствами обладает культар, который хорошо себя зарекомендовал на интактных растениях при зеленом черенковании (табл. 1).

С увеличением концентрации культара в среде происходило ингибирование роста надземной и корневой системы, которые отличались интенсивным радиальным ростом. Использование культара в диапазоне концентраций 0.3-0.5 мг/л также ингибировало развитие надземной системы, однако в меньшей степени. Развитие каллуса не отмечали ни в одном из вариантов. Концентрация культара свыше 1 мг/л вызывала гибель побегов. Укоренение побегов in vitro возможно только при определенной их длине. Ни одно из испытанных веществ не способствовало развитию корней непосредственно из меристематической верхушки, т.е. в начале необходим рост растяжением, а затем начинают развиваться корни. Введение в среду культара (0,1-0,2 мг/л) полностью ингибировало рост растяжением меристематических верхушек и вызывало развитие у них корневой системы. Часть корней была окрашена в зеленый цвет, т.е. корневая система приняла на себя функцию фотосинтезирующего органа при отсутствии роста надземной системы. Культар в концентрации 0,5 мг/л стимулировал развитие корней второго, а в некоторых случаях - третьего порядка у сирени.

С целью устранения отрицательного влияния ауксинов на процесс корнеобразования in vitro испытывали вещества из группы кремнийор-ганических соединений (мивал, крезацин, КЭП) и гумат натрия. Применение мивала и крезацина существенно повлияло на укоренение и развитие корневой системы земляники, актинидии китайской, груши. Оптимальные концентрации испытанных веществ находятся в диапазоне 0,1-2 мг/л, в котором изменяются все параметры развития корневой системы. Увеличивается процент укоренения, количество корней и их длина (табл. 2).

Укореняемость побегов земляники при сочетании кремнийорганических соединений с другими индукторами корнеобразования зависела от их концентраций. Укоренение ингибировалось полностью, если концентрация мивала и крезацина превышала 2 мг/л в сочетании с ИМК и при совместном их введении в питательную среду.

Аналогичное влияние совместного применения ИМК с кремнийор-ганическими соединениями отмечено в опытах с грушей. Стимулирующее влияние крезацина проявляется в более узком диапазоне концентраций (0,1-0,2 мг/л), а мивала при концентрациях 0,1-0,5 мг/л.

Можно предположить, что мивал обладает ауксиноподобным действием, но при этом не стимулирует развитие каллуса. При низких концентрациях мивала и крезацина наблюдается синергизм действия с ИМК на процессы роста и развития земляники in vitro - увеличивается высота растения за счет длины побегов и листьев.

Раздельное применение мивала и культара в малых концентрациях способствовало 100% укоренению земляники; совместное использование при больших концентрациях полностью ингибировало корнеобразование. Актинидия китайская в отличие от земляники максимально увеличивала развитие корней от совместного применения ИМК с мивалом, при этом концентрация ИМК также превышала концентрацию мивала. Совместное действие мивала и крезацина ингибировало укоренение данной культуры. Очевидно, актинидия требует большей концентрации ауксина на этапе индукции по сравнению с земляникой. Потому высокие концентрации ИМК в большей степени стимулировали корнеобразование актинидии, если ее применяли отдельно.

Существенно ускоряли прохождение этапов укоренения побегов земляники гумат натрия и азотнокислое серебро. Их использование в концентрации 0,5-1 мг/л сократило время начала укоренения побегов, ускоряло получение растений, пригодных к пересадке в нестерильные условия. Данные наших опытов с азотнокислым серебром и метионином дают нам основание утверждать, что на первом этапе укоренения значительный синтез этилена ингибирует заложение корней. Введение в питательную среду метионина полностью подавляло ризогенез в вариантах с ИМК и мивалом и значительно в вариантах совместного действия индукторов корнеобразовавния. Очевидно, что метионин увеличивает содержание этилена в фазу индукции заложения корней до ингибиторного уровня.

На всех этапах микроклонального размножения в питательных средах используют углеводы, в основном сахарозу, как наиболее мобильный углевод. Углеводы в культуре тканей имеют значение не только как элементы питания, но и как вещества, создающие вместе с солевым составом определенное осмотическое давление. Значение углеводов возрастает на этапе укоренения в связи с необходимостью подготовки растения к автотрофному питанию в нестерильных условиях. Концентрация углеводов сахарозы, фруктозы, глюкозы 10 г/л недостаточна для укоренения земляники. Маннит и сорбит, не имеющие пищевой ценности, но обладающие способностью влиять на осмотическое давление, также не способствовали образованию корней. Появление первых корней на побегах ясеня отмечалось на 9-10-й день после посадки на среду для укоренения. Влияние испытанных углеводов зависело от применяемых регуляторов роста (табл. 3).

Различные углеводы не оказали существенного влияния на частоту укоренения: в варианте с НУК она составила 86-93%, а в варианте с ИМК - 55-71%. Однако количество корней и их длина различались сушественно: максимальные значения отмечены на среде с 30 г/л сахарозы или 10 г/л глюкозы. Корни на среде с мальтозой были в 2,4 раза короче, чем на среде с сахарозой, и в 3,2 раза - чем на среде с глюкозой, при этом растения отставали в росте от растений на средах с сахарозой и глюкозой.

Рост и развитие корней in vitro зависят от аэрации питательной среды, которая, в свою очередь, зависит от концентрации агара. Укоренение побегов в плотной среде затруднено, развитие корней второго порядка не происходит. С уменьшением концентрации агара существенно увеличивается укоренение побегов и развитие корней второго порядка.

Однако при длительном развитии растений на средах с малым содержанием агара (1,5-2,5 г/л) у них появляются признаки стекловидности. На питательных средах, содержащих даже небольшие концентрации агара, никогда не развиваются корневые волоски, что говорит о недостаточном содержании кислорода. С учетом важности содержания кислорода при заложении и развитии корней и корневых волосков делали попытки заменить агар на этапе укоренения. При использовании полной среды М.С. и заменителей агара побеги погибали уже через несколько дней после посадки. Гибель побегов и растений, начавших развивать корни на среде 1/2 М.С. и заменителях агара (перлит, песок), была связана с иссушением верхнего слоя субстрата.

Агар стимулировал более раннее корнеобразование. Возможно, он повышает диффузию веществ из питательной среды, а также помогает диффузии веществ из экспланта, ингибирующих корнеобразование. Большая часть укоренившихся побегов в вариантах с заменителями агара прижилась в нестерильных условиях, однако их рост в дальнейшем был слабым. Объединение агара с перлитом способствовало получению хорошо развитой корневой системы земляники, которая обеспечила успешную приживаемость растений в нестерильных условиях. Сочетание перлита с агаром дает возможность уменьшить концентрацию агара в 3 раза. После автоклавирования и застывания среды в сосудах для укоренения образуются два слоя: вверху перлит, пропитанный средой, внизу агаровая среда с вкраплениями частиц перлита (табл. 4).

Соотношение перлита и питательной среды с агаром 0,5-1:1 по объему было оптимальным. Использование такой среды для укоренения груши не дало положительных результатов.

Существующая методика укоренения боковых побегов большого числа видов с использованием ауксинов возможна только после длительного пассирования. Положительное влияние на размножение, возможно, связано с ювенилизацией растительного материала. Не исключена вероятность стимулирующего эффекта этиоляции, так как с увеличением количества пассажей увеличивается количество боковых побегов, основание которых, как правило, этиолировано. Спуровые формы яблони и клонового подвоя 62-396 начали хорошо укореняться с 12-13 пассажа. Укоренение их зависело от солевого состава питательной среды. Укоренение древесных растений на более поздних пассажах создает биологические и организационные проблемы, которые отчасти решаются хранением культур на стадии пролиферации при пониженных температурах. Однако действие этого фактора может иметь отрицательные последствия на укоренение (влияние этиоляции и низких положительных температур). В связи с этим изучали влияние условий освещения на укоренение боковых побегов яблони in vitro (табл. 5). Результаты опытов выявили определенную зависимость между влиянием света, низкой температурой, регуляторов роста и укоренением побегов.

При использовании в качестве индуктора корнеобразования ИМК укореняемость побегов повышалась на 14-30%, если пролиферирующие культуры подвергались воздействию темноты, особенно в сочетании с низкими положительными температурами. Отсутствие света на этапе размножения существенно уменьшило укоренение в варианте с культаром и мивалом, особенно в варианте с культаром. Низкие положительные температуры уменьшили ингибирующее действие этиоляции в данных вариантах.

Если индукция укоренения (15 дней) проходила в условиях этиоляции, то укоренение уменьшалась на 10-64% в зависимости от индуктора корнеобразования. Как уже отмечалось, в укоренении основную роль играют ауксины, синтезируемые эксплантами. Они необходимы на этапе индукции корнеобразования, который продолжается 6-10 дней. Отсутствие света при хранении и укоренении стимулирует корнеобразование только в присутствии ИМК.

Сокращение темнового периода до 5-10 дней увеличило укореняемость побегов подвоя 62-396 на 24% при использовании ИМК. Хранение конгломератов земляники при низких положительных температурах перед укоренением побегов влияло на скорость прохождения этапов корнеобразования (табл. 6).

Последействие низких положительных температур зависело от индуктора корнеобразования. ИМК ускоряла, а культар тормозил прохождение этапов корнеобразования при таких условиях. Многочисленные опыты по зеленому черенкованию убедительно показывают, что укоренение черенков сильно ингибируется, если их поместить полностью в условия темноты (она необходима только для основания черенка). С учетом такой реакции черенков на отсутствие света мы испытывали различные способы затенения основания побега in vitro. Побеги подвоя 62-396 сажали в капсулу из фольги, заполненную питательной средой, или в питательную среду вводили активированный уголь. Наибольший процент укоренения (86%) отмечен в варианте с использованием капсулы. Введение активированного угля в среду уменьшало укоренение на 35%. Известно, что 1 мг активированного угля может поглотить 100 мкг 6БАП и НУК. В активированном угле содержатся феноламиды, что может отрицательно влиять на укоренение. Активированный уголь поглощает этилен, который неоднозначно влияет на процессы ризогенеза. Использование капсулы для укоренения стимулировало интенсивный рост корневой системы в длину, развитие корней второго порядка. Однако использование капсулы не технологично. Нами разработана композиционная среда, которая значительно улучшает укоренение яблони за счет эффекта этиоляции. Отличительной особенностью такой среды от стандартной является размещение на стандартной среде укоренения или размножения слоя среды (2-3 мм), состоящего из воды, агара и активированного угля (2-5%). Композиционная среда способствовала укоренению побегов после 4-го пассажа, увеличению в 2 раза общего числа корней, корней второго порядка и стимулировала ризогенез на средах, содержащих 6БАП. Через 1,5 мес длина укоренившихся побегов на среде, содержащей 6 мг/л 6БАП. увеличилась в 2 раза. Прирост побегов в контроле составлял 27% от опытного варианта. Свет (стандартная среда) ингибировал рост корней в длину и развитие корней второго порядка. На композиционной среде корни развивались между основной средой и затемненным слоем. К концу пассажа на корнях развились корневые волоски. Если стенки сосуда затемняли фольгой, то корневая система развивалась и внутри среды. На основании полученных данных укоренение древесных растений необходимо начинать уже после 4-5-го пассажа. Побеги длиной больше 2,5 см следует использовать для дальнейшего размножения, так как у них отсутствуют предпосылки возникновения стекловидности. Побеги длиной меньше 1,5 см необходимо пересаживать на среду с пониженным содержанием 6БАП (0,1 мг/л), а побеги 1.5-2,5 см - использовать для укоренения.

Жизнеспособность растений в нестерильных условиях во многом определяется способностью растений in vitro и in vivo к быстрому росту. В условиях in vitro это свойство зависит от культуры, регуляторов роста, условий выращивания. Часто на этом этапе отмечается гибель верхушек укорененных растений. В этой связи изучали влияние электростатического поля (10-40 квт/м) на укоренение побегов груши на фоне различных регуляторов роста. Электростатическое поле изменяло характер ризогенеза и рост укорененных побегов. В лучших опытных вариантах количество жизнеспособных побегов было больше на 47,5%, их длина превышала длину контрольных на 17%, увеличилось количество корней и их длина.

Размер боковых побегов влиял и на укоренение их in vitro. С увеличением длины боковых побегов увеличивается количество корней, их длина, высота растений и уменьшается количество листьев. Скорость роста надземной системы была выше у побегов длиной 0,5 см. Увеличение количества листьев у побегов небольшого размера, очевидно, связано с остаточным действием 6БАП. Не исключено, что небольшой рост побегов объясняется превалированием у них роста делением на этапе пролиферации побегов, которое реализуется увеличением количества листьев на этапе укоренения.

Укореняемость побегов яблони также зависела от их длины. Короткие побеги клонового подвоя 62-396 были способны к укоренению, но развитие надземной и корневой системы было слабое. Эффективным приемом повышения укоренения побегов является травмирование их основания, особенно продольные надрезы побегов. При таком способе на 27% увеличилась укореняемость и в 4 раза - количество корней спуровой формы ялони.

Прохождение основных этапов микроклонального размножения либо невозможно, либо очень затруднено без включения в состав питательной среды регуляторов роста. Для получения желаемой направленности морфогенеза иногда приходится применять их в больших концентрациях, что может вызвать побочные нежелательные реакции (образование каллуса, стекловидности, преждевременную гибель отдельных органов). Вместе с тем известно, что действие регуляторов роста определяется их способностью проникать в клетку. Ослабить некоторые барьеры проникновения веществ в клетку могут поверхностно-активные вещества (ПАВ). Действие твин-40 зависело от его концентрации, положительное влияние отмечено в вариантах с твин-40 (0,5-1 мг/л). При такой концентрации начало и интенсивность корнеобразования проходили при более низком содержании в среде индукторов корнеобразования (0,1 мг/л ИМК). Более высокие концентрации твин-40 снижали способность побегов земляники к ризогенезу. Более активным в этом процессе был гумат натрия в концентрации 0,5 мг/л.

Получение целостного растения in vitro и характер его развития зависели от солевого и гормонального состава среды, предшествующей укоренению.

Процесс корнеобразования боковых побегов роз лучше протекал, если предыдущий пассаж размножения проходил на среде, в которой соотношение NH4: N03 было 1: 2. При таком соотношении существенно увеличилось количество корней и их длина. Высота надземной системы не зависела от соотношения аммиачного и нитратного азота. Укоренение боковых побегов груши зависело от содержания в питательной среде для размножения 6БАП (табл. 7).

Несмотря на отсутствие взаимосвязи между концентрацией 6БАП и последующим укоренением побегов, имеется тенденция ее возрастания с увеличением концентрации 6БАП. Уменьшается число растений с погибшими верхушками и ингибируется способность корней первого порядка к ветвлению. Такая реакция груши на 6БАП согласуется с его физиологическими свойствами как цитокинина. Изучение качественного состава почек в процессе пассирования земляники показало, что при использовании в питательной среде больших концентраций 6БАП (1 мг/л) у всех сортов (Фрагинета, Хавеланд, Заря, Ко-кинская ранняя, Редгонтлит, сеянец 139-13-11) начиная с 4-5-го пассажа увеличивается количество почек, неспособных к развитию полноценных растений. По-видимому, это связано с длительным воздействием высокой концентрацией 6БАП.

Агар - наиболее часто используемый гельобразующий материал в культуре ткани. Он наиболее дорогой компонент среды. В связи с этим ведутся поиски заменителей агара, которые обладают гелирующими свойствами. В своих опытах проводили испытание гельрайта*. Использование гельрайта (0,5-2,5 г/л) при укоренении подвоя 62-396 стимулировало развитие стекловидности. Количество стекловидных растений уменьшалось, если гельрайт применяли вместе с агаром (2,5 г/л). Такая реакция растительных тканей, возможно, связана с его способностью поглощать двухвалентные катионы.

Выводы

1. Укоренение побегов земляники возможно на первом, робинии и вейгелы на втором пассаже, яблони и груши после 5-10-го пассажа в зависимости от гормонального и солевого состава среды. Сокращение в среде М.С. на 1/2 макроэлементов или на 1/2 -1/3 общего азота способствует увеличению укоренямости побегов земляники и яблони.

2. Характер укоренения побегов in vitro зависит от используемых индукторов корнеобразования, их концетра-ций и сочетаний. При введении в питательную среду гумата натрия, креза-цина, мивала, культара существенно увеличилось укоренение, уменьшилось развитие каллуса. Культар способствовал развитию корневой системы непосредственно из меристематической верхушки размером 250-300 мкм, при этом корни были окрашены в зеленый цвет. Применение ПАВ (КЭП, твин-40) повышало активность ИМК в 2 раза и уменьшало активность культара в 6 раз, позволяло проводить этап укоренения при более низких концентрациях ауксинов. Совместное применение ИМК и AgN03 ускоряло начало корнеобразования у земляники.

3. Укоренение побегов яблони зависело от способа и продолжительности этиоляции, температурного режима и регуляторов роста. Этиоляция пролиферирующих культур при пониженных температурах в дальнейшем увеличивала укоренение побегов на среде с ИМК и уменьшала - на среде с культаром и мивалом. Композиционная среда способствовала укоренению побегов яблони после 4-го пассажа, увеличению количества корней 2-го порядка, площади листьев, стимулированию развития надземной и корневой системы на среде с 6 БАП (6 мг/л).

4. Структурная среда, состоящая из перлита и агара в соотношении 0,5-1:1 по объему, способствует получению хорошо развитой корневой системы земляники, позволяет уменьшить кон-цетрацию агара в 3 раза.

5. Тип и концентрация углеводов в среде оказывает влияние на характер ризогенеза растений. Наиболее приемлемыми следует признать сахарозу и глюкозу.

Библиографический список

1. Алабина О.Н. Обоснование способов подготовки маточных растений ягодных

кустарников к вегетативному размножению: /О.Н. Аладина/ Дис. докт. с.-х. наук: 00.01.07. М., 20О4.

2. Катаева Н.В. Особенности микроразмножения трудноукореняемых со-

ртов яблони /Н.В.Катаева // Сельскохозяйственная биология. М., 1986. Вып. 4.

3. Кефели В.И. Онтогенез. М., 1970.

4. Орлов П.Н. Роль перивискулярных волокон в образовании придаточных корней у зеленых черенков садовых растений // Плодоводство ТСХА, 1985. Вып. 6. С. 102-115.

5. Abbott A.J. Culture of Mallus tissues in vitro multiplication of apples plants from isolated shoot apices// Sci. Horticult, 1976. № 4. P. 183-185.

6. Amitrani A. et al. Influence of the moment of application of IBA and darkness on in vitro rooting of M27 // Agr. Med. Vol, 1989. № 119. P. 417-423.

7. Bartoline G. The effects of regulators of ethylene synthesis on rooting of Olea European L. cuttings // Acta Horticult, 1986. V. 8.

8. Brian C.H.,Hicks G. Micropropagation of the Cold-hardy apple rootstock KSC-3 // Can. J. of Plant Sci., 1989. V. 69. № 2. P. 555-564.

9. Cardenas bare. Alicia et al. Potencial osmotica del medio de cultivocon differ-ents components parala propagation in vitro // Rev. fito teen. Мех., 2002. V. 25. № 2. P. 213-217.

10. Chu C.J. Effects of micropropagation techniques on guowth and development of miniature roses // Hort. Sci., 1990. V. 25. № 3.

11. Dennis P., Stmart et al. In vitro shoot proliferation of Pyrus calleriana from vegetative Buds // Hort. Sci., 1989. V. 24. № 2. P. 298-299.

12. Doolan D.W., Hennerby M.J., Moorgan J.V. Culture of micropropagated

strawberry plants in nutrient film technique // Acta. Horticult, 1983. № 133.

13. Druart P. In vitro promotion of root formation by apply shoots trough darkness effect on endogenous phenols and peroxidases // Z. Pflanrenphysiol, 1982. № 1085. P. 429-436.

14. Eliasson I., Bollmark Marie. Ethylene as possible mediator of light-induced inhibition or root growth // Physiol Plant, 1988. V. 72. № 2. P. 605-609.

15. James D. J. et al. The control of rhizogencsis in vitro in difficult-to-root apple rootstocks // Plant tissue culture, 1982. P. 187-198.

16. Geneve R.L. Root Formation in Cuttings of English Ivy treated with Paclobutra-zol // Hort. Sci.. 1980. V. 25. №6.

17. Kopcewier I. The influence of red light on auxin level in coleoptiles of etiolated seed - lights in two oat varieties // Interact. Plant Symp. Occas, 1985. V. 175. P. 47-48.

18. Nicholas I.R. The use of fluorescence microscopy to monitor root development in micropropagated explant // J. of Hort. Sci., 1986. V. 61. №4. P. 417-421.

19. Pliego-Alfare F.J. Development of in vitro rooting bioassay using juvenile stem cuttings of Persea americane Mill // Hort Sci., 1988. V. 63. №2. P. 295-301.

20. Raphael Plus. IAA-induced adventitious root fo rmation in green wood cutting of populas tremula and formation 2-indoline-3acetyeasparatic acid a new metabolite of exogeneo usly applied IAA // Physiol. Plant, 1989. V. 75. P. 86-89.

21. Reiner I. Control of Morphogenesis in Plant Tissue culture by Hormones and Nitrogen Compounds // Plant growth substrances, 1970. P. 686-694.

22. Ripley K.P. et al. Micropropagation of Euphorbia lathyris // Plant. Cell Tissue and Organ Culture, 1986. V. 5. № 3. 213-218.

23. Rugini E. et al. In vitro control of shoot virtification in almond and development of a technique to Eliminate apex necrosis and shoot base photo-axidation in pistachio // Hort. Sci., 1986. V. 21. №3.

24. Scott E. Sucrose and nitrogen regulation of adventitious root initiation from cultured rose shoot tip // Hort. Sci., 1984. V. 14.

25. Smith D.L. Ethylene associated phase change from juvenile to mature pheno-type of daylily // Phisiol. Plantarum, 1989. V. 76. P. 466-473.

26. Takashi Harada et al. Stades the Morphogenesis of asparagus organ formation in the in vitro culture of segments with a node excited from the shoots seedlings // J. Fac. Agr. Hokkaido Univ, 1983. V. 61. № 3. P. 295-306.

Рецензент - д. с.-х. н. А.В. Исачкин

Results of a long-term investigation into effect of various growth regulators, carbohydrates, passaging duration, agar quality, medium structure, food solution saline composition on root growth are provided in the article. Both stages and duration of rhyzogenesis questions have been discussed. Much consideration is given to the etiolation problem, physical factors, both hormonal and saline composition of nutrient medium. Both true and important data on light and medium composition influence upon rhyzogenesis and viability of plants under unsterile conditions are given in the article.

Key words: in vitro, growth regulators, nutrient medium, etiolation, carbohydrates, strawberries, apple tree, pear tree, lilac, rose, Chinese actinidia, ash tree.

Деменко Василий Иванович - д. с.-х. Н., РГАУ - МСХЛ имени К.Л. Тимирязева. Тел. 976-21-98.

Лебедев Вадим Григорьевич - к. б. н., Институт биоорганической химии имени академиков М.М. Шемякина и ЮА. Овчинникова РАН.

Шестибратов Константин Александрович - к. б. н., Институт биоорганической химии имени академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН.

На правах рукописи

ХАПОВА Светлана Александровна

УСЛОВИЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ IN VITRO И ПОСЛЕДУЮЩАЯ ПРОДУКТИВНОСТЬ РАСТЕНИЙ ЗЕМЛЯНИКИ

Специальность 06.01.07 - плодоводство

Москва 1997

Работа выполнена во Всероссийском селекционно-технологическом институте садоводства и питомниководства.

Научный руководитель - кандидат сельскохозяйственных наук В.А.Высоцкий.

Официальные оппоненты: доктор сельскохозяйственных наук Ф.Я.Поликарпова; кандидат сельскохозяйственных наук Т.А.Никиточкина.

Ведущее предприятие - Главный ботанический сад Российской академии наук им. М.Н.Цицина.

Защита состоится.. . ............ 1992 г.

в......... часов на заседании диссертационного совета Д

020.20.01 во Всероссийском селекционно-технологическом институте садоводства и питомниководства по адресу: 115598, Москва, ул.Заг^б^ш, 4, ВСТИСП. Учёный совет

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всероссийского селекционно-технологического института садоводства и питомниководства.

Ученый секретарь Специализированного совета, кандидат сельскохозяйственных наук

Л.А.ПРИНЕВА

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В нашей стране земляника является самой популярной ягодной культурой. Её ценят за ранние сроки созревания.

Постоянный и высокий спрос населения на свежие ягоды земляники и продукты их переработки обуславливается их высокими вкусовыми качествами. Ягоды земляники имеют прекрасный вкус, нежную консистенцию мякоти и приятный аромат, сбалансированное сочетание Сахаров и кислот, - это делает их десертным продуктом.

В восьмидесятых годах площадь под земляникой составляла 24 тыс. га с тенденцией увеличения удельного веса этой культуры до 40% от площадей, занимаемых всеми ягодными. В Московской области земляника занимает 45% площади промышленных посадок ягодников.

В настоящее время культура земляники в Нечерноземье, как и в целом в России, требует серьёзного внимания ввиду резкого сокращения плодоносящих площадей после подмерзания растений в суровые зимы, распространения рада опасных грибных и вирусных болезней. Закладка новых насаждений земляники сдерживается отсутствием в достаточном количестве оздоровленного посадочного материала перспективных сортов. В частности, биотехнические методы широко используются в практике плодоводства для получения и ускоренного размножения оздоровленного посадочного материала земляники.

Несколько лет назад были сделаны наблюдения, показывающие, что растения, регенерировавшие из соматических клеток в культуре тканей, не являются однородными, а проявляют значительную генетическую вариабельность. Эта вариабельность обозначается термином "сомаклональная изменчивость". Возникает вопрос, является ли сомаклональная изменчивость результатом реализации генетических различий уже существующих в соматических клетках изменений или это нарушается компонентами питательной среды.

Изменяя состав питательной среды, на которой культивируются различные виды растений, можно изменить их физиологическое состояние, усиливать и замедлять их рост, фотосинтез, повышать устойчивость к неблагоприятным воздействиям.

Для каждого вида и даже сорта культурного растения состав питательной среды необходимо подбирать индивидуально. Кроме того, для обеспечения активного роста нужна одна среда, для размножения - другая, для сохранения растений - третья, для ускорения - четвёртая. Следовательно, для каждого растения в агделыюсги, с учётом целей, необходимо разрабатывать особый состав питательной среды, соблюдая определённый баланс составляющих её компонентов. Данный факт свидетельствует о важности и необходимости расширения исследовательских работ по изучению условий влияния питательной среды in vitro на поведение растений регенератов земляники.

Выращивание растений в условиях in vitro даёт возможность контролировать многие факторы внешней среды: температуру, влажность, продолжительность и интенсивность светового дня.

Одним из главных направлений повышения продуктивности и устойчивости растениеводства и садоводства на современном этапе, является применение интенсивных технологий возделывания. В большинстве случаев в качестве обязательного приёма для борьбы с сорняками такие технологии включают применение гербицидов нового поколения, которые должны обладать высокой эффективностью и, в то же время, быть безвредными для человека и окружающей среды.

Система производства растений земляники с применением метода in vitro приобретает большую актуальность, поскольку ценность посадочного материала неизмеримо выше, чем рядовых растений.

Пели и задачи исследований. Целью настоящих исследований являлось изучение влияния условий культивирования на способность

земляники разных групп (обычные, ремонтантные, нейтрально-дневные) к размножению in vitro и последующую продуктивность растений.

Для реализации поставленной цели решались следующие задачи:

1. Изучить влияние продолжительности освещения на этапах микроразмножения на биометрические показатели.

2. Определить степень влияния разного состава питательных сред на коэффициент размножения эксплантов земляники.

3. Определить пороговые концентрации вводимых в среду гербицидов для последующего отбора сомаклональных вариантов и трансформантов по признаку гербицидоустойчивосги.

4. Изучить влияние сроков переноса пробирочных растений в нестерильные условия на приживаемость.

5. Провести сравнительную оценку развития земляники, полученной методом

in vitro с растениями, выращенными обычными методами, в полевых условиях.

Научная новизна результатов исследований. Выявлено существенное влияние периода освещения на число побегов и их длину, количество листьев, а так же на число и длину корней, развивающихся у эксплантов испытанных сортов земляники in vitro.

Изучено влияние элементов азотного питания на развитие эксплантов земляники на этапах пролиферации при размножении. Экспериментально показана возможность совместного применения 6-бензил-аминопурина и кинетина для стимуляции бокового ветвления у эксплантов земляники. "

Впервые в культуре ткани земляники изучено влияние гербицидов на биометрические показатели и пигментную систему развивающихся эксплантов.

Определены наиболее благоприятные сроки для высадки пробирочных растений земляники в почвенные субстраты в условиях зимних отапливаемых теплиц.

Практическая ценность работы. Полученные результаты позволяют оптимизировать процесс клонального микроразмножения земляники, снизить затраты труда и себестоимость продукции по сравнению с общепринятой технологией.

Использование оптимальных сроков переноса растений в нестерильные условия дает возможность повысить выход адаптированных растений на 20% и более. Выявленные селективные концентрации гербицидов могут быть использованы для создания гербицидоустойчивых форм и получения трансгенных растений.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на Всероссийском совещании "Молодые учёные -садоводству России" (г.Москва, 1995); на IV Международной конференции "Проблемы дендрологии, цветоводства, плодоводства, виноградарства и виноделия" (г-Ялта, 1996); на "The 18-th International group training on plant protection services" (Thailand, Bangkok, 1996); на IV Международной научно-практической конференции "Нетрадиционное растениеводство, экология и здоровье" (г.Симферополь, 1997); на VII Международной конференции "Биология клеток растений in vitro, биотехнология и сохранение генофонда" (г.Москва, 1997); на заседаниях секций ягодных культур Учёного совета ВСТИСП (1994-1997).

Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано семь научных статей.

Объём и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, трёх глав, выводов и рекомендаций, списка литературы. Текст диссертации изложен на 133 листах машинописного текста, содержит 26 таблиц, 20

рисунков. Список используемой литературы в:<лючает 237 наименований, в том числе 120 иностранных.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Место исследований. Эксперименты проводились в лаборатории биологического факультета Ярославского Государственного университета им. ДемидоваП.Г. Исходный материал для опытов был получен по стандартной методике клонального микроразмножения в лаборатории биотехнологии отдела размножения плодовых и ягодных культур ВСТИСП.

Объекты исследований. Объектами исследования были сорта земляники: Гора Эверест, Дукат, Женева, Зенга-Зенгана, Профъюжен, Рапелла, Редгонтлит, Трибьют, Тристар, Холидей.

Условия культивирования. Сосуды с эксплантами закрывали фольгой и термоусадочной плёнкой и культивировали при освещении 3 тыс. ж, температуре 24-26°С и относительной влажности в помещении 70-75%. Источники освещения: в светохомнаге лампы типа ЛДЦ-20, в теплице -лампы накаливания мощностью 200, 500 Вт. Освещённость в теплице составляла утром и во второй половине дня по 2,5 тыс. лк, в середине дня 4-5 тыс. лк.

В специальных экспериментах, при изучении влияния светового периода на растения регенераты, культивирование вели при 8-ми, 12-ти, 16-ти, 24-ёх - часовом световом дне.

Влияние минерального и гормонального состава питательных сред на последующую продуктивность микроразмноженных растений изучалось при фотопериоде - 16 часов световой день и 1=25°С. Интенсивность освещения 2500 лк.

Посадку, пересадку, деление конгломератов на отдельные побеги проводили в стерильных условиях ламинар-бокса КГО-1 по общепринятым методам.

Состояние эксплантов оценивали по специально разработанной пятибальной шкале.

Гербицвды вводили в питательную среду перед автоклавированием в следующих концентрациях, выбранных на основании результатов предварительных экспериментов: 2Ч0*М, 10"5М, 2*10"5М, КИМ, 2*1(НМ, 10-ЗМ.

а) симазин, ингибирующий фотосинтетический транспорт электронов, тормозящий выделение кислорода при фотосинтезе;

б) раувдап, ингубирующий синтез ароматических аминокислот.

В качестве контроля использовали питательную среду, не содержащую гербицидов.

Высадку пробирочных растений земляники в нестерильные условия проводили в два этапа:

1, Сначала укоренённые пробирочные растения пересаживали в перлит, а для поддержания высокой влажности накрывали стеклянными сосудами. Постепенно открывали стеклянные сосуды.

2. Затем, примерно через месяц, такие растения земляники пересаживали в автоклавированную почвенную смесь, которая состояла из почвы, торфа и песка в отношении 1:1:1 и переносили в условия отапливаемой теплицы.

В мае каждого года растения переносили в открытый грунт. Растения высаживали в почву, покрытую мульчирующим материалом марки СУФМК-60 чёрного цвета.

Учёты и наблюдения. В ходе экспериментов in vitro учитывали следующие показатели:

1) коэффициент размножения;

2) регенерация вегетативных органов (листьев, почек, побегов, корней) с учётом их числа на зкспланте и числа эксплантов, проявивших морфогенетические реакции;

3) укореняемость почек (или побегов).

У растений-регенерантов в полевых условиях проводили снятие следующих показателей:

1) количество усов;

2) число и площадь листьев, число рожков, цветоносов, цветков,

3) масса плодов;

4) выход укоренённых розеток;

5) изменение морфологии листьев и столонов;

6) наличие хлорофильных аномалий.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ

1. Реакция эксплантов земляники разных сортов на продолжительность освещения. В ходе работы мы определяли влияние режимов микроразмножения (8,12, 16 и 24 часа) на продуктивность растений разных групп сортов. Наибольшее число побегов имели экспланты, выращенные при 24-часовом периоде освещения. Среднее число побегов у сортов обычной группы (Згнга-Зенгана, Дукат, Редгонтлит) за весь период эксперимента составили 8,9 - 7,0 - 7,4 шт/эксплант, у сортов ремонтантной группы (Гора Эверест, Рапелла) - 8 - 2,9 шт/эксплант, у сортов нейтрально-дневной группы (Тристар, Трибьют) - 8,2 - 7,9 шт/экс-плант. Побегообразовательная способность у эксплантов сорта Рапелла оказалась очень низкой на всех периодах освещения (Табл. 1).

Оценка состояния растений, образуемых эксплантами разных сортов земляники в зависимости от светового режима культивирования показала, что лучше всего растения развивались при 16-часовом периоде освещения, например, состояние эксплантов, выращенных при 12-часовом периоде освещения составило 4,2 балла, при 16-часовом - 4,7 балла, а при 24-часовом - 3,6 балла.

Таблица 1

Среднее число побегов, образуемых эксплантами разных сортов земляники в зависимости от продолжительности освещения (шт.)

Сорта Продолжительность освещения

8 час/сут 12 час/сут 16 час/сут 24 час/сут

Гора Эверест 4,0 5,3 8,0 15,0

Рапелла 2,0 2,8 3,4 3,6

Дукат 4,3 5,0 7,8 11,0

Зенга-Зенгана 4,5 6,3 9,1 14,8

Редгонтлит 3,9 5,4 8,0 12,3

Тристар 5,4 6,7 8,5 14,2

Трибьют 5,6 6,8 9,2 12,1

X 4,0 5,1 7,7 Н,9

НСР05 взаимодействие 1,2

Полученные в условиях освещения продолжительностью 12 и 16 часов растения были адаптированы к нестерильным условиям.

Результаты наблюдений показали, что растения земляники, выращенные при 16-часовом периоде освещения in vitro давали существенно больше столонов, чем в случае культивирования при 12-часовом дне, а так же имели большую площадь листьев (Табл.2,3).

Действие света зависит от образования фоторецепторов и трансформации световой энергии в листовых клетках, фотостимуляции в них биосинтетических процессов.

Как показали наши исследования, более низкое количество содержания пигментов компенсируется растениями за счёт большей площади листовой поверхности.

Таблица 2

Среднее число столонов у разных сортов земляники, размноженных при различной продолжительности освещения (шт/расгение) (1995 г.)

Сорта Продолжительность освещения при микроразмножении

12час/сут 16 час/сут

Гора Эверест 33 ±3,6 40 ±2,8

Рапеяла 10 ±2,6 19 ±3,1

Зенга-Зенгана 26 ±3,1 41 ±4,2

Редгонтлит 37 ± 5,2 57 ±4,6

Дукат 14 ±3,7 24 ±3,5

Трисгар 18 +1,8 21 ±4,1

Трибыот 19 ± 1,6 25 ±4,2

Таблица 3

Влияние длины дня при культивировании in vitro на площадь листьев растений земляники в полевых условиях (1 августа 1995 г.)

Сорта Площадь листьев на 1 растении (см2)

12 час/сут 16 час/сут

Дукат 240 360

Зенга-Зенгана 550 720

Редгонтлит 450 576

Тристар 320 420

HCPos: световой режим 24,1 сорта 16,4

взаимодействие 18,2 2. Развитие эксплантов земляники в зависимости от концентрации в питательной среде разных форм азота. Как известно, процесс размножения in vitro происходит на питательных средах, из которых наибольшее распространение получила среда Мурасиге-Скуга. Однако, эта среда

содержит некоторые компоненты (особенно азот) в избыточных концентрациях.

Среди минеральных солей важное значение для роста и развития растений имеют азотосодержащие соли.

Мы исследовали влияние уменьшения состава питательной среды Мурасиге-Скуга в два и четыре раза. Наши эксперименты показали, что на этапах размножения снижать концентрацию солей в базовой среде Мурасиге-Скуга нецелесообразно. Поэтому мы попытались оценить концентрации разных форм азота в питательной среде на развитие эксплантов земляники. Оказалось, что снижение аммонийного азота в два раза не повлияло на коэффициент размножения (Табл. 4).

Таблица 4

Развитие эксплантов земляники сорта Тристар в зависимости от концентрации в питательной среде аммонийного азота

Концентрация квдо. Кол-во побегов, ТТГТ Длина побегов, ш Кол-во корней, птг Длина корней, мм Кол-во листов, тттт.

Кошроль 1650 мг/л 4,3 3,5 2,1 0,5 12,2

0,5. 4,0 3,2 0 0 14,1

0,25 3,9 3,2 0 0 12,2

0,125 3,8 3,0 0 0 11,0

0,5 4,3 3,2 0 0 12,1

0,253 3,9 3,2 0 0 12,1

0,125 3,8 3,2 0 0 10,3

НСРо5 - количество побегов

концентрация №ШОз Рф< Роз

Снижение нитратного азота в два раза отрицательно повлияло на побегообразовательную способность экспл актов. Коэффициент размножения снизился, по сравнению с контролем, на 3-4 единицы (Табл. 5).

Таблица 5

Развитие эксплантов земляники сорта Тристар в зависимости от концентрации в питательной среде нитратного азота

Концентрация Кол-во Длина

ЮТОэ побегов, побегов,

(часть) шт. см.

Контроль 1900 мг/л 5,5 2,8

НСРо5 - количество побегов

концентрация КЖ)з = 1,3

Возможно такой эффект связан с механизмом поглощения

нитратного азота. Известно, что использование кетокислот на синтез аминокислот происходит более интенсивно при наличии в питательной среде аммонийного азота; нитратный азот в меньшей степени используется на синтез аминокислот.

На основании полученных данных можно сделать заключение, что снижение концентрации аммонийного азота на 825 мг/л в среде Мурасиге-Скуга не приводит к снижению коэффициента размножения, что может быть реализовано на практике.

3. Действие иитокининов и ауксинов на развитие эксплантов земляники. Так же одним из важных компонентов питательной среды являются регуляторы роста. Тщательный подбор и выявление оптимальных концентраций позволяют повысить эффективность метода клонального размножения.

Мы изучали сочетание 6-БАП и кинетина на развитие эксплантов. Сочетания 6-БАП и кинетина в концентрациях 0,25 мг/л + 0,25 мг/л и 0,25 мг/л + 0,5 мг/л соответственно незначительно стимулировали рост почек и разворачивание листочков (Табл. 6).

Таблица 6

Зависимость коэффициента размножения от концентрации 6-БАП и кинетина в питательной среде (сорт Зенга-Зенгана)

Концешрация цигокининов, г/л Число образовавшихся побегов, шт. Длина побегов, см.

6-БАП Кинетин

Контроль 6-БАП 1 мг/л 10,0 2,5

0,25 0,25 3,8 2,0

0,75 0,25 9,2 2,5

1,0 0,25 14,4 2,5

НСРоз 4,6 1,2

Лучшие результаты были достигнуты при сочетании 6-БАП-1 мг/л и кинетина - 0,25 мг/л. В этом случае число образовавшихся побегов было больше, чем в контрольном варианте.

Наиболее развитые экспланты были пересажены на среду для укоренения. Использование регуляторов роста ауксиновой природы обеспечивало в наших опытах высокую укореняемость побегов земляники на 20ый день культивирования. Сорт Зенга-Зепгтш одинаково хорошо укоренялся при использовании ИМК и И УК в концентрациях 0,5-1 мг/л. Сорта Тристар и Дукат на среде, содержащей ИУК - 1 мг/л по сравнению с контролем имели большее число укоренившихся эксплантов.

4.Чувствительность пролиферирующих культур земляники к гербицидам in vitro. В последние годы большее внимание уделяется возможности создания с помощью биотехнологических методов новых форм растений, в частности с помощью отбора сомаклональных вариантов с хозяйственно-ценными признаками. Отбор сомаклональных вариантов по признаку гербнцидоустойчивости может проводиться только после выявления летальных и сублетальных концентраций селективных агентов для культур клеток, тканей и органов.

Таких данных для земляники в литературе нами обнаружено не было, поэтому следующий этап работы был посвящён изучению чувствительности культивируемых in vitro тканей и органов различных сортов земляники к присутствию в питательной среде двух типов гербицидов.

Следует отметить, что гербииидный эффект испытанных препаратов сохранялся в культуре in vitro.

В случае использования симазина в диапозоне концентраций 2*10-5 - 2ХЮ 4М проявлялся ингибнрующий эффект в отношении роста и развития эксплантов. Концентрация 10-3М вызывала у эксплантов всех сортов вначале признаки хлороза вплоть до полного обесцвечивания с последующей гибелью.

Наиболее чувствительным к симазину оказался сорт Женева, для эхсплантов которого концентрация 1СИМ оказалась летальной (Табл.7).

Таблица 7

Состояние эксплантов различных сортов земляники (в баллах) в зависимости от присутствия в питательной среде гербицидов (1,5 месяца)

Концентрация гербицида (М)

Сорт Тип гербицида Контроль (без гербицида) О 2» 10* Ю-" 24 О-5 10-4 2*10-"

Зенга- Симазин 5,0 4,8 4,6 3,8 3,6 2,2

Зенгана Раундап 5,0 4,6 4,2 3,0 0 0

Дукат Симазин 5,0 4,8 4,5 4,2 3,8 2,5

Раувдап 5,0 4,4 4,2 3,0 0 0

Редгошлиг Симазин 4,9 4,6 4,4 4,1 3,6 2,4

Раундап 4,9 4,5 4,0 2,6 0 0

Гора Симазин 4,9 4,5 4,4 3,9 3,8 1,5

Эверест Раувдап 4,9 4,5 3,7 2,4 0 0

Женева Симазин 4,8 4,5 4,0 4,2 0 0

Раундап 4,8 4,5 3,3 1,9 0 0

Трисгар Симазин 4,9 4,6 4,3 4,2 3,8 0

Раундап 4,9 4,5 3,4 2,7 0 0

Трибыот Симазин 4,9 4,7 4,2 4,1 3,8 1,5

Раундап 4,9 4,5 3,6 3,0 0 0

При изучении эффекта присутствия в питательной среде раундапа было выявлено, что три наиболее высокие концентрации (Ю-4, 2*1 (КМ, 10"3М) приводили к полной гибели эксплантов.

Для подтверждения пониженной чувствительности отобранных эксплантов их пересаживали повторно на питательные среды, содержащие сублегальные концентрации соответствующих гербицидов. При последующем культивировании отобранных условно толерантных эксплантов различных сортов земляники наблюдалась гибель значительной части культур. Это свидетельствует о том, что в подавляющем большинстве случаев мы имеем дело не с устойчивыми к гербицидам органами и тканями, а с эксплантами, которые не успели погибнуть в предыдущем субкультивировании.

Известно, что гербициды подавляют многие процессы метаболизма в растениях, в частности оказывают существенное влияние на фотосинтетическую активность.

Симазин подавляет фотосинтез у растений за счёт связывания с так называемым 32К белком, входящим в состав тилакоидной мембраны. Учитывая механизм гербицидного действия, который основан на торможении реакции Хилла, мы провели серию экспериментов по влиянию его на фотосинтетическую активность.

Глифосат воздействует на синтез очень важных ароматических аминокислот, точкой его приложения является фермент 3 - фосфошикимат -1 карбоксивинилтрасфераза. Вероятно, подавление данной стадии метаболизма вызывает дефицит ароматических аминокислот, накопление шикимата и в результате при контакте с глифосатом на концентрации 10-3М -гибель эксплантов земляники.

Таким образом, нами определены селективные концентрации двух гербицидов: симазина - КИМ, раундапа - 10-5М.

5.Влияние гербицидов симазина и раундапа на фотосинтез изолированных побегов земляники in vitro. В процессе работы мы изучили влияние содержания пигментов в листьях земляники при культивировании с раундапом и симазином (Рис. 1).\Мы отмечали высокую чувствительность эксплантов сорта Женева. Такая повышенная чувствительность нашла отражение и в реакции фотосинтетического аппарата на содержание пигментов в листьях земляники.

На восьмую неделю культивирования в варианте с концентрацией раундапа 2Х106М отмечали стимулирующее действие этого препарата на содержание количества пигментов у эксплантов.

6. Адаптация микропобегов к нестерильным условиям в зависимости от сроков пер<зсадки. Для выявления лучших сроков приживаемости растения земляники каждый месяц переносили в нестерильные условия. Наблюдения, проведённые за дальнейшем развитием таких растений, выявили, что самым благоприятным сроком выведения пробирочных растений был период с мая по август. Например, в 1996 году высокий процент приживаемости был у сортов Тристар - 96%, Трибьют -93%. У сорта Редгонтлит в июле 1996 года на 20% повысилась приживаемость растений по сравнению с 1994 годом этого же месяца. Эксперименты показали, что растение, высаженное в мае-июне-июле быстро развивалось. Так, растения сорта Зенга-Зенгана (Рис.2), перенесённое в нестерильные условия 11 мая с длиной побегов 3,5 см, через 1,5 месяца имело длину побегов 9 см, крупные листья; ещё через месяц растения высаживали в полевые условия. При выведении эксплантов в нестерильные условия в марте, растениям требуется 3,5 месяца для высаживания в полевые условия, а это на один месяц больше, чем в первом варианте.

а 80 -60 -40 -20 -

хлорофилл а

хлорофилл Ь

каратиноиды

Рисунок 1. Содержание пигментов (%) в листьях земляники при культивировании на средах с раундапом и симазином в течение двух недель.

а) сорт Женева - контроль (без гербицидов) на средах с раундапом И - концентрация 2 10"6 М

б) сорт Женева "ЦЦр - концентрация 10"5 М на средах с симазином р! - концентрация 10"3 М

Сорт Зенга-Звнганнз

Рис.2 Приживаемость растений земляники в зависимости от срока пересадки в нестерильные условия (сорт Зенга-Зенгана)

При переводе эксплантов земляники в нестерильные условия осенью и зимой процент приживаемости был низкий. Например, у сорта Зенга-Зенгана в декабре (1996 г.) укоренившихся растений было меньше на 70% по сравнению с результатами мая (1996 г.); у сорта Дукат в январе укоренившихся растений меньше: на 55% по сравнению с маем (1996 г.). По данным за три года (1994-1996 гг.) мы можем отметить, что экспланты, пересаженные в нестерильные условия в осенне-зимний период имели низкий процент приживаемости.

По-видимому, отмеченное нами явление связано в первую очередь с невозможностью поддерживать в производственных культуральных помещениях (зимних теплицах) одинаковые условия (освещённость, спектральный состав света) на одном уровне в течение всего года. Нельзя

также исключить влияние внутренних биологических причин в поведении растений, связанных с ритмами роста и развития растений.

Таким образом, приживаемость растений при переносе в нестерильные условия зависела от способа и срока высадки. Использование оптимальных сроков переноса растений в нестерильные условия дают возможность повысить выход адаптированных растений до 30%. 7. Хозяйственно-биологическая оценка растений разных сортов земляники, полученных методом in vitro и обычным способом. Оценивая хозяйственно-биологическое значение сортов земляники, мы сравнивали влияние двух методов размножения растений разных сортов на урожайность, число розеток, массу ягод, количество плодов, поражённых гнилями (Табл.8).

Таблица 8

Хозяйственно-биологическая оценка растений земляники, полученных разными способами размножения____

Сорта Способ размножения Средняя урожайность содного растения за 1 год, г Среднее число розеток содного растения в1год вегетации Среднее число розеток с одного растения воПгод вегетации

Зенга-Зенгана in vitro 126 37 38

стандартный 125 30 37

Редгоитлит in vitro 108 57 52

стандартный 105 40 53

Дукат in vitro 95 18 19

стандартный 99 14 18

Тристар invito 199 21 21

стандартный 183 18 21

Трибьют invito 186 24 26

стандартный 178 23 25

Женева invito 177 20 19

стандартный 173 21 19

НСР05: сорта 26,5 года 8,9

взаимодействие 5,6

Эксперименты показали, что в 1 год выращивания у некоторых сортов земляники число розеток зависит от метода размножения, так у сорта Зенга-Зенгаиа число розеток от учётного растения было больше на 8 шт. По сравнению с растениями, полученными обычным методом. На второй год этот эффект сглаживался. Процент плодов, поражённых гнилями, был выше у сортов, имеющих две волны плодоношения: во-первых, сказывается резкое колебание ночных и дневных температур осенью в Ярославской области; во-вторых, влияет накопление патогена в растениях за весь период вегетации. По урожайности и массе ягод существенных отличий не было.

Экономические вопросы размножения земляники in vitro.

Метод клонального микроразмножения является достаточно трудоёмким и требует большого количества материальных затрат. Вместе с тем высокая рентабельность метода in vitro обусловлена экономией площадей культивационных помещений, сокращением периода выращивания растений, увеличением коэффициента размножения, улучшением качества продукции (ССЭ), а также работой в осенне-зимний период.

Оценку экономической эффективности производства посадочного материала с применением метода in vitro проводили на примере земляники сорта Зенга-Зенгана. Производственные затраты вычисляли на основе методических рекомендаций ВСТИСП (Табл. 9).

Расчёты показали, что при числе исходных эксплантов - 5 шт., коэффициенте размножения - 8, числе субкультивирований - 3 с учётом рада коэффициентов (коэффициент приживаемости эксплантов, выхода пригодных для укоренения побегов, укореняемое™, приживаемости при адаптации) в течение полугода по общепринятой технологии можно получить 5000 шт. Побегов. Себестоимость одного экспланта, выращенного по общепринятой технологии составит 1,22 руб.

Важным аспектом экономической эффективности технологии in vitro явилось снижение затрат труда на выращивание 1 тыс. шт. растений земляники in vitro.

Таблица 9

Экономическая оценка производства посадочного материала земляники с

использованием метода клоналыюго микроразмножения (1 тыс. шт.)

Показатели Метод in vitro

1. Себестоимость 1 шт., руб. 1,22

2. Себестоимость и накладные расходы (180%), руб. 1,68

3. Цена реализации 1 шт., руб. 7,2

4. Прибыль от 1 тыс. шт., руб. 5,52

5. Число микропобегов на 1 м2, шт. 1000

6. Прибыль на 1 м2, руб. 11,04

6. Уровень рентабельности, % 328

Таким образом, метод клоналыюго микроразмножения даёт

значительный экономический эффект, что показывает преимущество использования его в производстве.

1. Продолжительность периода освещения оказывает существенное влияние на развитие эксплантов земляники испытанных сортов. Среди изученных режимов культивирования продолжительность освещения 12 и 16 часов оказались наиболее благоприятными с точки зрения коэффициента размножения, длины образуемых побегов, количества листьев, а на этапе укоренения числа и длины корней.

2. Выращенные in vitro растения земляники при 16-ти часовом освещении давали существенно больше столонов, чем в случае культивирования при 12-ти часовом периоде, поэтому такие растения могут быть использованы в качестве исходных для закладки маточников. Растения, выращенные in vitro при 12-ти часовом освещении, характеризовались большим содержанием хлорофиллов

а, Ь и каратиноидов по сравнению с растениями, полученными при 16-ти часовом дне на 10%-30%.

3. При клональном размножении испытанных разных сортов земляники возможно снижение концентраций аммонийного азота в два раза по сравнению с базовой средой без ухудшения такого показателя развития, как коэффициент размножения

4. Для стимуляции бокового ветвления у эксплантов испытанных сортов земляники лучшие результаты даёт сочетание 6-БАП в концентрации 1 мг/л с кинетином 0,25 мг/л.

5. Включение в питательные среды гербицидов различного спектра действия -раундапа и симазина в концетрациях 2Х106М - 10"3М - оказывало существенное влияние на ростовые процессы у культивируемых эксплантов земляники. Раундап обладал более фототоксичным эффектом и вызывал гибель основной массы эксплантов в концентрации 2*1 (ИМ. Селективной концентрацией симазина является 10^М, раундапа 10~5М для испытанных семи сортов земляники. Эти исследования могут стать основой для отбора форм земляники с повышенной устойчивостью к гербицидам.

6. Присутствие в питательных средах гербицидов раундапа и симазина на уровне концентраций 105, 10~3М ингибировало синтез хлорофилла а, хлорофилла b и каратиноидов. Концентрация 2Х10"6М раундапа на восьмую неделю культивирования приводила к увеличению количественного содержания хлорофилла а и хлорофилла Ь.

7.0пределены наиболее благоприятные сроки для перегадай микроразмноженных растений в нестерильные условия с мая по август, что даёт возможность повысить выход адаптированных растений на 20% и более.

8. Оценка состояния растений в полевых условиях показала, что в первый год выращивания у растений сортов Зенга-Зенгана, Дукат, Профъюжен, Хомдей, Редгонтлит число розеток зависит от метода размножения. У растений, выращенных in vitro количество розеток было больше приблизительно в 1,3

раза. На второй год вегетации различия по числу образуемых розеток у всех исследуемых сортов земляники сглаживались. Существенных различий по урожайности испытанных сортов в зависимости от способа размножения не выявлено.

При размножении методом in vitro растений земляники рекомендуем в питательной среде Мурасиге-Скуга снизить концентрацию аммонийного азота до 825 мг/л. Для обеспечения массового размножения побегов оптимальная комбинация регуляторов роста 6-БАП и кинетина 1 мг/л, 0,25 мг/л соответственно.

Пересадку пробирочных растений в нестерильные условия необходимо проводить с мая по август.

Для отбора сомаклональных вариантов и трансгенных экземпляров с повышенной гербицидоусгойчивостью использовать в питательной среде следующие концешрации гербицидов: раувдапа - 2Х10"5, Ю"5М; симазина - 2М0"4, 1(НМ.

1. Хапова С. А. Влияние условий культивирования на клональное микроразмножение земляники и процессы её адаптации к нестерильным условиям // Тезисы докладов Всероссийского совещания "Молодые учёные -садоводству России". - М. -1995. - С.156-158

2. Хапова С.А. Влияние гербицидов на фотосинтез и развитие эксплантов

земляники in vitro // Материалы IV Международной конференции "Проблемы дендрологии, цветоводства, плодоводства, виноградарства и виноделия". -Ялта,-1996.-Т.2.-С.61-63

3. Khapova S. Tissue-culture strawbeny no virus // The 18 th International group training on

plant protection services. - Thailand. -1996. - Т. 1. - P.M-M3

4. Высоцкий В.А., Хапова С.А. Чувствительность культур изолированных органов земляники к гербицидам / Сб. труд. ВСТИСП. - М.; -1997. - С.83-89

5. Хапова С.А. Влияние состава субстрата и сроков пересадки в нестерильные

условия на приживаемость пробирочных ратсений земляники // Тезисы докладов научной конференции ЯрСХА. - Ярославль. -1997.

6. Хапова С.А. Реакция изолированных побегов земляники на присутствие гербицидов в питательной среде // Тезисы докладов VII Международной конференции "Биология клеток растений in vitro, биотехнология и сохранение генофонда". -1997. - С.382-383

7. Хапова С.А. Влияние светового режима на морфологию и ситез пигментов

растений земляники в полевых условиях // Материалы VI Международной научно-практической конференции "Нетрадиционное растениеводство, экология и здоровье". - Симферополь. -1997. - Т. 1-2. - С. 140-141

Для экспериментов в условиях in vitro использована цельная кровь 11 клинически здоровых людей-добровольцев и 36 больных с термической травмой.

2.3. Методы исследования

2.3.1. Иммунологические методы исследования

2.3.1.1. Оценка спонтанной и индуцированной секреторной активности мононуклеаров периферической крови в условиях in vitro

Объектом исследования служила венозная кровь, взятая у здоровых людей-добровольцев и у больных с термической травмой натощак, в утренние часы. Кровь стабилизировали гепарином из расчета 10 ЕД/мл. Фракцию мононуклеаров выделяли по методу на градиенте плотностью 1,077 г/мл при центрифугировании (400 g 45 минут) с использованием фиколла и верографина. Для формирования среды плотностью 1,077 г/см 3 использовали 9% (масса/объем) раствор фиколла-400 («ДиаМ», Москва) и 60 % официнальный урографин («Schering», Германия). Опалесциирующее кольцо мононуклеаров забирали из интерфазы пастеровской пипеткой и трижды центрифугированием отмывали средой 199 путем при 689g в течение 5-7 минут. Отмытые и ресуспендированные клетки доводили до концентрации 1 10 7 клеток/мл. Их жизнеспособность оценивали путем окраски их 0,2 % раствором трипанового синего, жизнеспособность составляла не менее 98%.

Культивирование клеток проводили при 5% содержании углекислого газа в воздушной среде при температуре 37 0 С в течение 1 часа. В стерильных условиях содержание ячеек было аспирировано, с последующим двухкратным промыванием от неприлипших клеток раствором Хенкса. Затем в каждую ячейку добавляли по 250 мкл 10 % эмбриональной телячьей сыворотки и 80 мкг/мл гентамицина. Далее клетки культивировали в течение 72 часов, в условиях термостата при 5% содержания углекислого газа в воздушной среде, при температуре 37 0 С, в супернатанте определяли концентрацию цитокинов.

2.3.1.2. Исследование врожденного иммунитета

Определение количества лейкоцитов и лейкоцитарной формулы. Количество лейкоцитов в периферической крови определяли общепринятым меланжерным методом в камере Горяева. Лейкоцитарную формулу подсчитывали в мазках крови, фиксированных метиловым спиртом и окрашенных азур II-эозином по Романовскому-Гимзе . Подсчитывали 200 лейкоцитов с дифференциацией эозинофилов, базофилов, метамиелоцитов, палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов, лимфоцитов, моноцитов. Их количество выражали в относительных (%) и абсолютных ( 10 9 /л) величинах.

Функциональную активность фагоцитов исследовали по показателям НСТ-теста и фагоцитозу.

Исследование поглотительной способности фагоцитов периферической крови проводили на модели поглощения частиц латекса. Для оценки фагоцитоза 200 мкл крови смешивали с 20 мкл взвеси частиц монодисперсного (диаметр 1,7 мкм) полистерольного латекса. После 60 минут инкубации при температуре 37 0 С из суспензии готовили препараты, которые высушивали, фиксировали метанолом и окрашивали азур II – эозином по Романовскому-Гимзе. С помощью иммерсионной микроскопии учитывали активность фагоцитоза – % клеток, захвативших хотя бы одну частицу латекса, интенсивность фагоцитоза – число поглощенных микросфер латекса в 100 подсчитанных клетках и фагоцитарное число – число поглощенных микросфер латекса на один фагоцит.

НСТ-тест проводили, учитывая интенсивность восстановления фагоцитами нитросинего тетразолия (НСТ) в его нерастворимую форму - диформазан по методу А.Н. Маянского и М.Е. Виксмана (1979). Проводили спонтанный и индуцированный НСТ-тест.

В пробирки с 0,2 мл крови добавляли 0,1 мл 0,2% раствора стандартно разведенного нитросинего тетразолия в 0,1 М фосфатном буфере (рН 7,4). Для оценки индуцированного НСТ-теста в каждую лунку добавляли 20 мкл суспензии частиц монодисперсного (диаметр 1,7 мкм) полистерольного латекса (индуцированная серия) или 20 мкл 0,9% NaCl (спонанная серия). После 30-минутной инкубации при температуре 37 0 С к реакционной смеси добавляли 3 мл 0,1 % соляной кислоты для остановки реакции. Пробирки центрифугировали при 1000 об./мин в течение 5 мин. Надосадочную жидкость сливали, из осадка готовили мазки. После сушки препараты фиксировали метанолом и 5минут окрашивали 0,1% водным раствором сафранина. С помощью микроскопии при увеличении 90х10х1,5 определяли % клеток, восстанавливающих НСТ, и интенсивность реакции по активности восстановления НСТ, для чего НСТ-позитивные клетки делили на 3 группы:

1 – клетки с гранулами диформазана в цитоплазме общей площадью менее 1/3 площади ядра;

2 – клетки с гранулами диформазана в цитоплазме более 1/3 площади ядра;

3 – клетки с гранулами диформазана, превышающими размеры ядра.

Для получения коэффициента интенсивности реакции количество клеток первой группы, выраженное в процентах, умножали на 1, второй группы – на 2, третьей – на 3, результаты суммировали и делили на 100.

Условия и методы культивирования тканей in vitro. Современные проблемы науки и образования Материалы и методика

Рекомендованный список диссертаций

Клональное микроразмножение садовых растений 2003 год, кандидат сельскохозяйственных наук Шипунова, Анна Аркадьевна

Обоснование приемов световой биотехнологии при клональном микроразмножении винограда 2004 год, кандидат биологических наук Соболев, Андрей Александрович

Гормональная регуляция продуктивности и качества винограда в условиях Южного Дагестана 2005 год, кандидат сельскохозяйственных наук Агаханов, Альберт Халидович

Похожие диссертационные работы по специальности «Виноградарство», 06.01.08 шифр ВАК

Клональное микроразмножение и депонирование перспективных форм груши 2012 год, кандидат сельскохозяйственных наук Ташматова, Лариса Владимировна

Система производства посадочного материала винограда высших категорий качества 2006 год, доктор сельскохозяйственных наук Кравченко, Леонид Васильевич

Заключение диссертации по теме «Виноградарство», Батукаев, Абдулмалик Абдулхамидович

Список литературы диссертационного исследования доктор сельскохозяйственных наук Батукаев, Абдулмалик Абдулхамидович, 1999 год

Библиографическая ссылка

2.3. Методы исследования

2.3.1. Иммунологические методы исследования

2.3.1.1. Оценка спонтанной и индуцированной секреторной активности мононуклеаров периферической крови в условиях in vitro

2.3.1.2. Исследование врожденного иммунитета

Рекомендуем почитать

Условия и методы культивирования тканей in vitro. Современные проблемы науки и образования Материалы и методика

Рекомендованный список диссертаций

Клональное микроразмножение садовых растений 2003 год, кандидат сельскохозяйственных наук Шипунова, Анна Аркадьевна

Обоснование приемов световой биотехнологии при клональном микроразмножении винограда 2004 год, кандидат биологических наук Соболев, Андрей Александрович

Гормональная регуляция продуктивности и качества винограда в условиях Южного Дагестана 2005 год, кандидат сельскохозяйственных наук Агаханов, Альберт Халидович

Похожие диссертационные работы по специальности «Виноградарство», 06.01.08 шифр ВАК

Клональное микроразмножение и депонирование перспективных форм груши 2012 год, кандидат сельскохозяйственных наук Ташматова, Лариса Владимировна

Система производства посадочного материала винограда высших категорий качества 2006 год, доктор сельскохозяйственных наук Кравченко, Леонид Васильевич

Заключение диссертации по теме «Виноградарство», Батукаев, Абдулмалик Абдулхамидович

Список литературы диссертационного исследования доктор сельскохозяйственных наук Батукаев, Абдулмалик Абдулхамидович, 1999 год

Библиографическая ссылка

2.3. Методы исследования

2.3.1. Иммунологические методы исследования

2.3.1.1. Оценка спонтанной и индуцированной секреторной активности мононуклеаров периферической крови в условиях in vitro

2.3.1.2. Исследование врожденного иммунитета

Рекомендуем почитать

Поиск по сайту